[发明专利]庆大霉素的抗原模拟表位及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及庆大霉素抗原模拟表位及其应用。

背景技术

  庆大霉素(Gentamicin, GM)一种氨基糖苷类抗生素，具有耳毒性和肾毒性，可使感觉毛细胞发生退行性和永久性改变，损害前庭神经功能和耳蜗神经，此药物主要经肾排泄并在肾蓄积，损害近曲小管上皮细胞核肾小管上皮细胞。如果人们长期食用GM超标的动物食品，会导致其在人体内的蓄积，进而对人体造成严重危害。

目前，筛查违法添加的庆大霉素的检测方法包括薄层色谱和高效液相色谱等。薄层色谱法操作容易、耗时短、所需设备低廉，但难于定量，一般只作定性分析。高效液相色谱法灵敏、精确、可靠，但所需设备昂贵且运行费用高，很难在基层工作中大规模开展。免疫学检测方法具有灵敏、特异、快速和廉价的特点，已广泛运用于食品和环境样品的快速检测。但是该方法必须使用GM标准品，不仅增加了检测成本，而且对检测人员及环境易造成危害，在一定程度上制约了免疫学方法的应用和推广。有鉴于此，人们开始采用抗独特型抗体及抗原模拟表位技术来实现有害小分子物质标准品的替代，并取得了一定的进展。噬菌体展示肽库技术的主要特点是可有效地筛选出与目标靶体特异结合的噬菌体展示多肽，该技术在探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探索未知蛋白质空间结构表位、新型疫苗的研制等方面应用广泛。

本发明通过用噬菌体展示肽库技术，从肽库中筛选出能与靶分子（抗庆大霉素单克隆抗体）特异性结合的多肽（抗原模拟表位），该抗原模拟表位具有与天然庆大霉素分子相似的免疫反应特性，通过获得的庆大霉素抗原模拟表位，以代替价格昂贵且毒性强的庆大霉素标准品，并作为竞争抗原或固相包被抗原应用于庆大霉素的免疫学检测。

发明内容

本发明以抗庆大霉素单克隆抗体为靶分子，将靶分子固相包被于酶标板上，投入噬菌体随机展示十二肽库，进行亲和淘选，获得了1种庆大霉素的抗原模拟表位，其氨基酸序列如下：

庆大霉素抗原模拟表位：从噬菌体随机十二肽库中筛选的庆大霉素抗原模拟表位（多肽），其氨基酸序列为：WHWQWWLQTDAT。

本发明还涉及编码上述抗原模拟表位氨基酸序列的核苷酸序列，优选为TGG CAT TGG CAG TGG TGG TTG CAG ACG GAT GCG ACG。

上述抗原模拟表位（多肽）结构中，上述模拟表位结构中，大写英文字母分别代表二十一种已知天然L-型氨基酸残基或其D-型异构体的一种，即W代表色氨酸残基， H代表组氨酸残基，L代表亮氨酸残基，Q代表谷氨酰胺残基，T代表苏氨酸残基，D代表天冬氨酸残基，A代表丙氨酸残基。

本发明提及的庆大霉素抗原模拟表位（多肽）可通过噬菌体扩增、化学合成或基因工程重组表达的方式进行大量制备。噬菌体扩增是指将展示有庆大霉素抗原模拟表位（多肽）的噬菌体，通过生物扩增的方式，大量繁殖生产展示有庆大霉素抗原模拟表位（多肽）的噬菌体粒子。化学合成是指依据公布的模拟表位的氨基酸序列，通过化学合成多肽的方式进行多肽合成。基因工程重组表达的方式是指将编码模拟表位的基因，通过克隆至表达载体，以多肽-融合蛋白的形式进行庆大霉素抗原模拟表位的大量制备。

本发明还涉及所述庆大霉素抗原模拟表位在免疫学检测分析中的应用。免疫学检测的类型包括酶联免疫吸附检测、胶体金免疫层析、免疫斑点杂交等基于抗原-抗体特异性反应的免疫学分析检测类型。

本发明庆大霉素抗原模拟表位（WHWQWWLQTDAT）在应用时，可以把合成的模拟表位用于免疫学检测分析，将通过噬菌体扩增获得的展示有庆大霉素抗原模拟表位（多肽）的噬菌体粒子直接用于分析检测，当然，也可以将庆大霉素抗原模拟表位从噬菌体上切下来代替庆大霉素标准品来进行免疫学检测分析。

还涉及庆大霉素抗原模拟表位以固相抗原或竞争抗原在免疫学检测分析中的应用。

还涉及庆大霉素抗原模拟表位作为固相抗原在胶体金免疫层析检测分析中的应用。

前述庆大霉素抗原模拟表位可以替换价格昂贵且毒性强的庆大霉素标准品，并作为竞争抗原或固相包被抗原应用于庆大霉素的免疫学检测，该抗原模拟表位具有与天然庆大霉素分子相似的免疫反应特性，效果非常好。

本发明的有益效果是：本发明庆大霉素抗原模拟表位可以替换价格昂贵且毒性强的庆大霉素标准品，并作为竞争抗原或固相包被抗原应用于庆大霉素的免疫学检测，该抗原模拟表位具有与天然庆大霉素分子相似的免疫反应特性，效果非常好。减少了庆大霉素对人体健康的危害，节约了成本，具有很高的应用价值。

附图说明