[发明专利]高产叶黄素转基因小球藻及其制备方法有效
申请号: | 201210563819.X | 申请日: | 2012-12-20 |
公开(公告)号: | CN103045626A | 公开(公告)日: | 2013-04-17 |
发明(设计)人: | 林祥志;马瑞娟;荣辉;林汝榕;程汝滨;王昭凯;杨善军;马勇;陈水波;柯秀蓉;李惠丽 | 申请(专利权)人: | 国家海洋局第三海洋研究所 |
主分类号: | C12N15/61 | 分类号: | C12N15/61;C12N1/13;C12N15/63;C12N9/90;C12N1/21;C07C403/24;C12R1/89;C12R1/01 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 361005 *** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 高产 叶黄素 转基因 小球藻 及其 制备 方法 | ||
1.一种培育转基因小球藻的方法,为将IPP异构酶编码基因导入目的小球藻中,得到转基因小球藻,所述转基因小球藻的叶黄素产量大于所述目的小球藻;
所述IPP异构酶的氨基酸序列为序列表中的序列2。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在在于:所述IPP异构酶编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端第545-1093位核苷酸。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在在于:所述IPP异构酶编码基因以IPP异构酶编码基因表达盒的形式导入目的小球藻;
所述IPP异构酶编码基因表达盒包括CAMV35S启动子、IPP异构酶编码基因和CYC1终止子;
所述IPP异构酶编码基因表达盒的核苷酸序列具体为序列表中的序列1。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在在于:
所述IPP异构酶编码基因表达盒通过重组载体导入目的小球藻;
所述重组载体为将所述IPP异构酶编码基因表达盒插入表达载体中得到的载体;所述表达载体具体为pCAMBIA2301。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在在于:
所述重组载体通过重组农杆菌导入目的小球藻;所述重组农杆菌为将所述重组载体导入农杆菌中得到的重组菌。
6.由权利要求1-5所述方法得到的转基因小球藻。
7.一种重组载体,为将IPP异构酶编码基因表达盒插入表达载体中得到的载体;所述表达载体具体为pCAMBIA2301;
所述IPP异构酶编码基因表达盒包括CAMV35S启动子、IPP异构酶编码基因和CYC1终止子;
所述IPP异构酶编码基因表达盒的核苷酸序列具体为序列表中的序列1。
8.一种重组菌,为将权利要求7所述的重组载体导入农杆菌中得到的重组菌。
9.由权利要求6所述的转基因小球藻、权利要求7所述的重组载体或权利要求8所述的重组菌在制备叶黄素中的应用。
10.一种生产叶黄素的方法,包括如下步骤:
1)无水乙醇超声破碎由权利要求1-5所述方法得到的转基因小球藻或由权利要求6所述的转基因小球藻,再加入KOH水溶液后超声皂化,得到溶液A;
2)将所述溶液A用二氯甲烷萃取,收集二氯甲烷相,即得到叶黄素。
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