[发明专利]一种乳制品中叶酸含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明是关于一种乳制品中叶酸含量的检测方法。

背景技术

叶酸(folic acid，FA)为蝶呤衍生物，亦称喋酰谷氨酸，是机体细胞生长和繁殖的必须物质，其分子式为C₁₉H₁₉N₇O₆，分子量为441.40。叶酸主要用于各种原因引起的叶酸缺乏以及叶酸缺乏引起的巨幼红细胞性贫血的治疗，恶性贫血的辅助治疗，以及妊娠期、哺乳期妇女的预防给药；叶酸还对人体的神经健康有重要作用，它可提供大量游离碳原子，是制造神经末梢和构成传递神经冲动的重要化学物质的原料。

由于叶酸具有特殊的生理功能，特别是对妊娠期、哺乳期妇女和胎儿，叶酸经常作为营养强化剂用于保健食品及配方食品中，因此，如何测定这些食品中的叶酸含量，以监控这些食品的质量就变得尤为重要。

文献“高效液相色谱法测定叶酸片中叶酸的含量”(高桂花等人，《济宁医学院学报》，2010年04期)公布了一种测定叶酸的方法，但该方法主要应用于叶酸含量大于50％的叶酸片剂中，色谱峰中干扰物质很少，用普通的紫外色谱方法就可以直接进行测定，而对于干扰物质较多，叶酸含量较少的食品就很难通过这种方法进行定量。

CN102175878A公开了一种酶联免疫法测定食品、饲料和维生素产品的方法，但酶联免疫法长期使用成本较高，不利于生产企业节约成本。

文献“高效液相色谱-柱后衍生法测定乳粉中的叶酸含量”(关晓书等人，《民营科技》，2010年11期)和“固相萃取-反相高效液相色谱法检测婴幼儿配方乳粉中叶酸的含量”(包怡红等人，《营养学报》，2009年3期)分别公布了利用柱前和柱后衍生的方法测定乳粉中叶酸的含量，但两种方法中使用的衍生剂过二硫酸钾和高锰酸钾具有很强的氧化性，容易腐蚀高效液相色谱仪器的管路，长期测定容易造成设备的损坏。

文献“荧光粉光光度法测定食品中叶酸的含量”(黄宏南等人，《中国卫生检验杂志》，2002年01期)公布了一种采用反相高效液相色谱荧光法测定保健食品中的叶酸含量的方法，其中主要是利用高锰酸钾氧化衍生叶酸，并通过过氧化氢滴定过量的高锰酸钾，再用荧光光度计测定叶酸含量。该方法使用了两种氧化剂共同作用过程繁琐，此方法的回收了仅为75％，回收率不在规定的80％～120％之间，不能作为一种成熟的方法应用于实际检测。

针对现有技术中存在的问题，本发明利用含有C18填料的固相萃取技术进行除杂，再使用反相高效液相色谱经过过氧化氢衍生后检测乳粉中叶酸的含量，本发明衍生过程中稍过量的过氧化氢在加热时分解，不会带入检测设备中，因此可以防止设备长期使用过程中发生管路氧化。本方法具有操作简单、方法灵敏度高、选择性好、回收率高、重现性好等特点，并且该方法主要适用于基质复杂、叶酸添加量少的乳粉中。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乳制品中叶酸含量的检测方法。本发明方法具有很高的灵敏度、精密度和准确度。

为达上述目的，本发明提供了一种乳制品中叶酸含量的检测方法，所述方法包括如下步骤：

(1)样品前处理：取乳制品样品，配制成水溶液，超声波振荡萃取，加入高氯酸沉淀蛋白质，离心，过滤，滤液备用；

(2)固相萃取净化：利用固相萃取柱对步骤(1)得到的滤液进行净化，以除去其中的干扰物质，收集过柱后的样品，氮气吹干，备用；

(3)衍生：将步骤(2)得到的样品用水溶解，加入过氧化氢水溶液、氢氧化钠水溶液和水，混匀后加热处理，然后水洗冷却得到衍生样品；

(4)色谱检测：使用C18色谱柱对步骤(3)得到的衍生样品进行检测。

本发明利用固相萃取小柱除去食品中的大部分干扰物质，再使用过氧化氢溶液对叶酸进行衍生，最后使用高效液相色谱荧光检测法测定食品中的叶酸含量。本发明方法具有很高的灵敏度、精密度和准确度。

根据本发明的具体实施方案，本发明的检测方法中，所述乳制品可以为液态乳制品或是乳粉，步骤(1)中是取乳制品样品调配成固形物含量0.1～0.2g/ml的水溶液。

根据本发明的具体实施方案，本发明的检测方法中，步骤(1)中配制的乳制品样品溶液先在30～50℃下超声波萃取10～20min(本发明中超声波功率的不同对萃取结果基本无影响)，再加入50％～60％浓度的高氯酸沉淀蛋白质，沉淀完全后4000r/min离心15min，过滤，滤液备用。

其中优选步骤(1)中配制的乳制品样品溶液先在50℃下超声波萃取15min。