[发明专利]乙肝e抗原的纯化方法在审
申请号: | 201210566412.2 | 申请日: | 2012-12-24 |
公开(公告)号: | CN103882042A | 公开(公告)日: | 2014-06-25 |
发明(设计)人: | 万晓春;田永帅 | 申请(专利权)人: | 深圳先进技术研究院 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/51;C07K14/02;C07K1/22 |
代理公司: | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙) 44316 | 代理人: | 宋鹰武 |
地址: | 518055 广东省深圳*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 乙肝 抗原 纯化 方法 | ||
1.一种乙肝e抗原的纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:
将含有重组乙肝e抗原基因的重组质粒转入细菌本体,得到重组细菌,所述重组乙肝e抗原基因包括乙肝e抗原基因和连接于乙肝e抗原基因5’端或3’端的多聚组氨酸编码基因;
加入诱导剂进行重组细菌培养;
将重组细菌裂解,并将裂解液进行离心,收集离心所得上清液,将离心所得沉淀用高浓度变性剂溶解制备沉淀溶解液;
将固定化金属螯合亲和层析介质与上清液或沉淀溶解液在允许多聚组氨酸融合乙肝e抗原结合或吸附至所述介质的条件下接触;
从所述介质选择性洗脱所述多聚组氨酸融合乙肝e抗原。
2.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,在洗脱之前还包括以下步骤:在所述多聚组氨酸融合乙肝e抗原保持与所述介质结合的条件下清洗所述结合的介质。
3.根据权利要求2所述的纯化方法,其特征在于,所述清洗的步骤包括用至少一种多聚组氨酸融合乙肝e抗原清洗缓冲液清洗所述结合的介质,其中所述多聚组氨酸融合乙肝e抗原清洗缓冲液包含100至200mmol/L NaCl和30至100mmol/L Tris,pH范围在6.5-7.5。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的纯化方法,其特征在于,所述细菌本体选自Escherichia coli,Shigella sonnei,Shigella dysenteriae,Shingellaflexneri,Salmonella typhimurium,Salmonella enterica,Enterobacteraerogenes,Serratia marcescens,Yersinia pestis,或者Klebsiellapneumoniae。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的纯化方法,其特征在于,所述重组质粒由重组乙肝e抗原基因转入原核表达质粒形成。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的纯化方法,其特征在于,所述介质为载有过渡态金属离子的固定化金属螯合亲和层析介质。
7.根据权利要求6所述的纯化方法,其特征在于,所述过渡态金属离子为Cu2+、Zn2+、Ni2+或Co2+。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的纯化方法,其特征在于,所述诱导剂为IPTG,所述重组细菌的培养温度为37℃,培养时间为3h。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的纯化方法,其特征在于,所述洗脱的步骤包括用至少一种多聚组氨酸融合乙肝e抗原洗脱缓冲液洗脱吸附的多聚组氨酸融合乙肝e抗原,其中,所述多聚组氨酸融合乙肝e抗原洗脱缓冲液包含5至80mmol/L咪唑或5至20mmol/L EDTA;和30至100mmol/LTris。
10.根据权利要求1-3中任一项所述的纯化方法,其特征在于,在选择性洗脱后还进一步包括以下的一种或多种:羟基磷灰石色谱、阳离子交换色谱、亲和色谱、体积排阻色谱、疏水相互作用色谱、渗滤或超滤。
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