[发明专利]龙眼核多酚的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种龙眼的加工方法，尤其是涉及龙眼加工行业废料龙眼核中提取龙眼核多酚的工艺方法。

背景技术

我国2010年的龙眼产量为131.2万t（2010年我国主要水果产量分省(区,市)分布情况。中国果业信息,2012,(12):56），而与上世纪90年代的高价（最高价为12～14元/公斤）相比，却一直保持着低迷状态（平均收购价格0.8～2元/公斤），这之间的巨大反差，是许多果农无法接受的，再加上年年亏本，果农种植龙眼的积极性受到严重挫伤（陈恩海.2009年漳州热区典型南亚热带水果生产情况及2010年生产形势预测.中国热带农业,2010,(01):39-40）。因此如何提高龙眼产业的经济效益，促进龙眼产业的健康发展，是当前国内龙眼产业函待解决的问题。由于龙眼鲜果不易存放，货架期短，再加上保鲜技术还不成熟，约有1/3的龙眼鲜果是通过各种方式深加工后出售。而在龙眼果的深加工过程中，作为加工废弃物的龙眼核目前的利用率几乎为零。龙眼核系龙眼的种仁，重量约占龙眼果实鲜重的17%，由于没有进行综合利用，大量废弃的龙眼核不仅造成环境的污染，同时也造成资源的白白浪费（李升锋,肖更生,陈卫东,等.龙眼果实资源研究与开发利用.四川食品与发,2004,40(4):35-39）。

龙眼核含有丰富的淀粉、还原糖、粗纤维、蛋白质、果胶、多酚等天然产物，同时还含有多种矿物元素、维生素以及人体必须氨基酸等营养素。其中淀粉含量为60.88%，还原糖含量为9.67%，粗纤维含量为6.85%，蛋白质含量为5.58%，果胶含量为5.19%，多酚含量为4.72%，脂肪含量为3.23%（刘释文.龙眼核综合利用的基础研究.福建农林大学,2007）。而其中的多酚又被称为“第七类营养素”，大量实验研究结果表明，植物多酚具有抗氧化性、抗癌、抗衰老、抑菌等作用，适量摄取植物多酚能有预防和抑制疾病发生的作用（宋立江,狄莹,石碧.植物多酚研究与利用的意义及发展趋势.化学进展,2000,12(2):161-169）。过剩的自由基会引发癌症、中风、冠心病等疾病，而植物多酚能够有效清除人体内过剩的自由基，且其清除能力强于V_E（Yogesh Baravalia,Mital Kaneria,Yogeshkumar Vaghasiya,et.al.Antioxidant and antibacterialactivity ofdiospyros ebenum Roxb.Leaf Extracts Turk J Biol,2009,(33):159-164）。同时多酚具有增强人体的免疫功能、防止贫血、降低血液粘度、预防血栓等效果（赵扬帆,郑宝东.植物多酚类物质及其功能学研究进展.福建轻纺,2006,(11):107-109.）。国外研究从龙眼核的丙酮提取物中利用柱色谱法分离出乙酰甲基-老鹳草素（acetonylgeraniin），该化合物属于水解类多酚（HsuF L,Lu F H,Cheng J T.Influence of acetonylgeraniin,a hydrolysable tannin from Euphorialongana,on orthostatic hypotension in a rat model.Planta Medica,1994,60:297–300.）。随后又利用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-ESI-MS）技术对龙眼核50%乙醇提取物中酚类化合物的结构进行了分析。发现其中含有没食子酸（gallic acid,GA）、鞣花酸（ellagic acid,EA）、单没食子酰基葡萄糖（monogalloyl-glucose）、单没食子酰基二葡萄糖甙（monogalloyl-diglucose）、二倍没食子酰基二葡萄糖甙（digalloyl-diglucose）、五倍至七倍没食子酰基葡萄糖（penta-toheptagalloyl-glucose）、鞣花酸-戊糖共轭物（ellagic acid-pentose conjugate）、没食子酰基-六元联苯-吡喃葡萄糖（galloyl-HHDP（Hexahydroxydiphenoyl）-glucopyranose）、六倍没食子酰基-六元联苯-吡喃葡萄糖（pentagalloy-HHDP-glucopyranose）、原花青素A类二聚物（procyanidin A-type dimmer）、原花青素B2（procyanidin B2）和槲皮素-3-O-鼠李糖苷（quercetin-3-O-rhamnoside）等多种酚类化合物，这些化合物大部分属于水解类多酚（SoongY Y，Barlow P J.Quantification of gallic acid and ellagic acid from longan seed and mango kerneland their effects on antioxidant activity.Food Chemistry，2006,97:524–530;Soong Y Y, Barlow P J.Isolation and structure elucidation of phenolic compounds from longan seed by high-performanceliquid chromatography–electrospray ionization mass spectrometry.Journal of ChromatographyA,2005,1085:270-277）。国内主要针对对龙眼核多酚的提取工艺，以及产品的活性进行了进一步的研究，其中对龙眼核多酚的乙醇提取工艺和超声辅助提取工艺进行了优化，得到乙醇提取法的最佳工艺条件是：提取时间106min，乙醇浓度58%，提取温度64℃，液料比9:1，在此条件下龙眼核粗多酚提取量为42.690mg/g；超声辅助提取法的最佳工艺条件是：提取温度69℃，提取时间52min，超声功率162W，在此条件下龙眼核粗多酚提取量为42.209mg/g。并采用DM21大孔吸附树脂纯化龙眼核多酚，确定了最佳柱层析条件为：pH值4.2，上样浓度1mg/mL，上样流速5BV/h，洗脱剂70%乙醇，洗脱流速1.5BV/h。在此条件下，龙眼核多酚纯品的得率为5.2%，纯度为74.14%。龙眼核多酚HPLC谱图表明，龙眼核多酚中含有表儿茶素和芦丁，其中表儿茶素的含量高达21.35%。龙眼核多酚清除DPPH.、.OH、O2-.三种自由基的IC₅₀值分别为0.4326mg/mL、142.4mg/mL、99mg/mL，对照品Vc清除三种自由基的IC₅₀值分别为0.7292mg/mL、63.94mg/mL、15.91mg/mL，龙眼核多酚对DPPH.自由基的清除效果明显优于Vc。另有采用Sephadex LH-20柱层析对龙眼核丙酮提取物进行纯化，得到6个馏分，其中GA和EA主要分别存在于馏分3和馏分2～4中，其含量分别为36.75mg/g和81.22mg/g，利用HPLC-ESI-MS对各馏分中多酚结构的分析检测出包括GA和EA在内的17种已知和10种未知酚类化合物。还有对龙眼核提取液降血糖作用的研究，以常规降血糖药(格列苯脲)为阳性对照，通过对正常小鼠和糖尿病小鼠进行降血糖治疗试验，发现龙眼核提取液能有效地缓解经四氧嘧啶诱发的糖尿病小鼠体内的高血糖症状，降血糖率达77.4%，具有良好的降血糖效果(黄儒强,邹宇晓,刘学铭.龙眼核提取液的降血糖作用.天然产物研究与开发,2006,(06):991-992)。同时在对龙眼核提取物提高小鼠抗氧化功能的研究发现，龙眼核提取物可显著增强小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，降低脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量，从而提高了小鼠的抗氧化功能。(黄儒强,刘学铭.龙眼核提取物提高小鼠抗氧化功能的研究.华南师范大学学报,2008,(01):108-111)。