[发明专利]利用基因枪获得转基因小麦的方法及其专用培养基

权利要求书

1.一种利用基因枪获得转基因小麦的方法，包括如下步骤：

1）取小麦幼胚用权利要求9或10中所述培养基A进行培养；

2）使用基因枪对经步骤1）所述培养的小麦幼胚进行轰击，将目的DNA导入所述小麦幼胚细胞中；

3）将经步骤2）所述轰击的小麦幼胚用权利要求9或10中所述培养基A进行培养；

4）将经步骤3）所述培养的小麦幼胚用权利要求9或10中所述培养基B进行培养获得愈伤组织；

5）将步骤4）获得的愈伤组织用权利要求9或10中所述培养基C进行分化培养，最终获得含目的DNA的转基因小麦植株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中所述培养的时间为3—5小时；和/或，步骤3）中所述培养的时间为14—18小时。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤2）中所述轰击的次数为一次；每次所述轰击的轰击距离为6cm，轰击压力为1100psi，轰击直径为2cm。

4.根据权利要求1—3中任一所述的方法，其特征在于：所述轰击使用金粉对待转化DNA进行分散；每次所述轰击中所述金粉的使用量为200μg，所述待转化DNA为1μg；所述金粉的粒径为0.6μm。

5.根据权利要求1—4中任一所述的方法，其特征在于：所述分化培养后还包括生根培养的步骤，所述生根培养使用的培养基为权利要求9或10所述的培养基D。

6.根据权利要求1—5中任一所述的方法，其特征在于：在所述分化培养时使用含筛选剂的所述培养基C；和/或，在所述生根培养时使用含筛选剂的所述培养基D。

7.根据权利要求1—6中任一所述的方法，其特征在于：

所述筛选剂为草铵膦，所述草铵膦在所述分化培养和生根培养中的浓度为5—10mg/L；

和/或，步骤2）中所述轰击时所述目的DNA连接于环形质粒上。

8.根据权利要求1—7中任一所述的方法，其特征在于：

所述培养的温度为22—26℃；

和/或，所述分化培养的光周期为每天24小时中16小时光照、8小时黑暗，光照强度为150μmol/m²/s；

和/或，所述生根培养的光周期为每天24小时中16小时光照、8小时黑暗，光照强度为150μmol/m²/s；

和/或，步骤1）中所述小麦幼胚为开花10-14天的小麦幼胚。

9.一种获得转基因小麦的成套培养基，包含如下分别独立包装的四种培养基中的四种、任意三种、任意两种或任意一种：培养基A、培养基B、培养基C和培养基D；

所述培养基A是由MS基本培养基、甘露醇、2,4-D、蔗糖和凝固剂制成的固体培养基；所述甘露醇在所述培养基A中的浓度为80—100g/L；所述2,4-D在所述培养基A中的浓度为4.5—5.5mg/L；

所述培养基B是由MS基本培养基、2,4-D、硫酸铜、水解酪蛋白、蔗糖和凝固剂制成的固体培养基；所述2,4-D在所述培养基B中的浓度为2.0—3.0mg/L,所述硫酸铜在所述培养基B中的浓度为0.5—0.7mg/L,所述水解酪蛋白在所述培养基B中的浓度为0.4—0.6g/L；

所述培养基C是由MS基本培养基、激动素、蔗糖和凝固剂制成的固体培养基，或由MS基本培养基、激动素、蔗糖、凝固剂和筛选剂制成的固体培养基；所述激动素在所述培养基C中的浓度为0.2—0.3mg/L；

所述培养基D是由1/2的MS基本培养基、乙磺酸、α-萘乙酸、蔗糖和凝固剂制成的固体培养基，或由1/2的MS基本培养基、乙磺酸、α-萘乙酸、蔗糖、凝固剂和筛选剂制成的固体培养基；所述乙磺酸在所述培养基D中的浓度为0.4—0.6g/L，所述α-萘乙酸在所述培养基D中的浓度为0.4—0.6mg/L。

10.根据权利要求9所述的成套培养基，其特征在于：所述蔗糖在所述培养基A、B、C和D中的浓度为20—40g/L；

和/或，所述凝固剂为植物凝胶，所述植物凝胶在所述培养基A、B、C和D中的浓度为3g/L；

和/或，所述培养基A、B、C和D的pH值为5.6—5.8。