[发明专利]一种脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断试剂制备领域，尤其是一种脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂及其制备方法。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2（英文缩写Lp-PLA2）是磷脂酶A2超家族中的一员, 属于PLA2-VIL , 含有441 个氨基酸残基, 相对分子质量约为45400。人血浆Lp-PLA2 由巨噬细胞、淋巴细胞以及肥大细胞合成与分泌, 在动脉粥样硬化部位大量存在, 并可被炎症介质调节，具有促动脉粥样硬化的作用。Lp-PLA2是一种新的炎性反应标志物，在AS（强直性脊柱炎）的几个主要阶段中均起着作用。Lp-PLA2主要由巨噬细胞和淋巴细胞产生，在早期的关于Lp-PLA2与 AS的研究中[2-3]因Lp-PLA2能水解致炎因子如血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)及结构相关的氧化磷脂，因此曾被认为能抑制炎性反应，甚至能抑制动脉粥样硬化的形成，故也被称为血小板活化因子乙酰水解酶(platelet activating factor acetylhydrolase，PAF-AH)。但是近年来的研究已证实Lp-PLA2更大的作用在于促进AS的发生与发展。  Lp-PLA2通过水解动脉内膜上的LDL上的氧化卵磷脂，从而生成溶血卵磷脂(Lysophosphatidylcholine，Lyso-PC) 和游离的氧化脂肪酸 (Oxidized Fattey Acid，ox-FA)，后二者是促炎介质，能刺激粘附因子和细胞因子的产生，从而导致单核细胞由管腔向内膜聚集。单核细胞在内膜聚集后衍生为巨噬细胞，巨噬细胞吞噬oxLDL 变成凋亡的泡沫细胞。而这些活化的巨噬细胞和泡沫细胞会产生更多的Lp-PLA2重返至循环中。凋亡的泡沫细胞聚集成动脉粥样硬化性斑块，斑块能释放细胞因子和蛋白酶，降解纤维帽的平滑肌细胞和胶原基质，使斑块变得脆弱、破裂，从而引起AS的发生与发展，导致血栓形成和心血管事件的发生。

目前用于检测Lp-PLA2的试剂主要为酶联免疫吸附法原理产品，运用抗原抗体特异性结合的原理,产品存在操作繁琐，数据重复性差，价格昂贵等缺点。 

发明内容

针对上述问题和不足，本发明所要解决的技术问题是：怎样提供一种制备成本低廉，稳定性好，易于保存，数据重复性好，检测灵敏度高的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂及其制备方法。

为了解决上述问题，本发明采用了以下的技术方案。

一种脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a、按照以下重量份配比称取配料，1-十四酰-2-(4-硝基苯基琥珀酰)卵磷脂0.2～0.6份，柠檬酸0.1-0.5份，1-壬烷磺酸钠0.04-0.2份，乙二胺四乙酸0.06-0.20份，维生素E 0.03-0.09份；b、将上述配料溶于100重量份的纯化水中，再用浓度5 mol /L盐酸调溶液至pH2.50-5.00，即配成脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂。作为优化，上述方法a步骤中，所述配料的重量份配比数据可以进一步缩小为1-十四酰-2-(4-硝基苯基琥珀酰)卵磷脂0.3份，柠檬酸0.15份，1-壬烷磺酸钠0.08份，乙二胺四乙酸0.1份，维生素E 0.06份；b步骤中pH值范围可以进一步缩小为pH2.60，这样优化后，可以进一步提高制得试剂的测试效果。

一种脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂，采用上述制备方法制备得到。

下面结合本发明原理，对本发明效果做详细说明。