[发明专利]一种用于诊断脑血管狭窄的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病诊断试剂盒，特别涉及一种用于诊断脑血管狭窄的试剂盒及其在诊断脑血管疾病或在诊断Ⅰ型神经纤维瘤合并脑血管狭窄疾病中的应用，属于疾病诊断领域。

背景技术

脑血管狭窄是危害人类健康的常见病，可导致高致残率、高致死率的缺血性脑卒中。其发病机制不完全清楚，从而使脑血管狭窄的防治陷入“瓶颈”。目前，尽管随着脑卒中1级预防、2级预防知识的普及，动脉支架、颈动脉内膜剥脱及颅内外动脉搭桥技术的应用，部分患者的脑缺血症状得到缓解，致残率、致死率在一定程度上得到控制，但由于脑血管狭窄的发病原因、发病机制尚不完全清楚，而目前针对脑血管狭窄的防治仅仅处于疾病下游水平，其结果是治标不治本。同时近年来脑血管狭窄的发病率越来越高，发病年龄越来越趋于年轻化，而且常常找不到发病诱因，所以从基因水平寻找到脑血管狭窄的发生机制，从根本上降低该病的发生率，是防治脑血管狭窄的新的突破口之一。近年来，Nfl基因与血管性疾病的关系正在成为新的研究热点，但Nf1基因突变位点多变、类型不定，突变与脑血管狭窄之间的关系尚不明确。

NF1是一种常见的常染色体显性遗传病，病因明确，即由17号染色体上的Nf1基因突变所致。在自然人群中的发病率约为1/3500，20%~60%有家族史，发病无明显的性别差异。临床表现主要为累及全身皮肤的多发性神经纤维瘤，同时NF1还可累及多个器官系统，发生肾动脉狭窄、脑血管狭窄、视神经胶质瘤、脊柱侧凸、椎管内或颅内肿瘤等。

1989年，Nfl基因被定位于人类染色体17q11.2，并于1990年克隆出该基因。Nf1基因是人类基因组中较大的基因，全长350kb，含60个外显子，其转录部分的长度约11-13kb。NF1基因在Genbank的登录号为NM_001042492.2。从功能上来看，Nf1基因是抑癌基因，其编码的由2838个氨基酸组成的蛋白质即神经纤维瘤蛋白（neurofibromin）是一种肿瘤抑制物，在机体多个组织与器官均有表达，如平滑肌细胞、血管内皮细胞及施旺细胞。神经纤维瘤蛋白的主要功能域（GAP-relateddomain，GRD）由第21-27a外显子编码，与GTP酶激活蛋白家族有同源性，能够激活体内的Ras-GTPase，导致结合状态的GTP水解，Ras失活，因此GRD是Ras信号转导的一种负调节因子，而Ras是机体的癌基因，如Nf1基因发生突变，神经纤维瘤蛋白的质或量发生改变，Ras活性增高，从而可产生神经纤维瘤甚至恶性周围神经鞘瘤（Malignant Peripheral nerve sheath tumor,MPNST）。

Nf1基因结构复杂，突变位点多变，突变类型不定，且在Nf1全长基因存在大量假基因，因此，Nf1基因突变的筛查仍将是一个具有挑战性的工作。根据人类基因突变数据库（HGMD）显示（http://www.hgmd.org/），截止到2011年4月，共发现Nf1基因的1273个突变，包括错义突变、剪切突变、插入、缺失及复杂重排等，但突变缺乏明显的热点区域，大多数散发病例各自携带特异的突变位点，由于不同的NF1患者临床症状不一，所以甚至在同一个家系患者中的不同成员之间也存在不同的突变位点及突变类型。