[发明专利]多酚污染物生物降解过程中的相互作用及研究方法

权利要求书

1.一种多酚污染物生物降解过程中的相互作用的研究方法，其特征是步骤如下：

1）配置用于降解多酚污染物的培养基；酚类降解实验所用的选择性培养基是在无机盐培养基基础上添加苯酚或间甲酚作为碳源；在研究不同间甲酚浓度对苯酚降解影响时，固定苯酚的浓度，选择间甲酚的浓度不同浓度的几个梯度水平；在研究不同苯酚浓度对间甲酚的降解影响时，固定间甲酚的浓度，选择苯酚的不同浓度的几个梯度水平；每个梯度进行平行实验；

2）利用铜绿假单胞菌GIMT1.074接种到培养基中进行培养；

3）采用光密度法和恒重干燥法进行测量菌体浓度；采用高效液相色谱法测定降解体系中的酚类物质浓度；

4）根据培养过程中细胞浓度的变化和苯酚与间甲酚降解情况的变化，得到多酚污染物生物降解过程中的相互作用数据。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的培养基是：500mg(NH₄)₂SO₄，200mgKH₂PO₄，100mg MgSO₄，800mg Na₂HPO₄·12H₂O，20mg酵母浸粉，10mL痕量元素母液和1000mL H₂O。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是所述的痕量元素母液成分如下：0.4gMnSO₄·4H₂O，0.4g ZnSO₄·7H₂O，0.1gNa₂MoO₄·2H₂O，0.1g CuSO₄·5H₂O，1.0g CaCl₂，10.0g Na₂SO₄，2.0g FeSO₄·7H₂O，0.5mL H₂SO₄，2.0g NaOH，12.0g乙二胺四乙酸二钠和1000mL H₂O。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤2）的培养方法是：将纯净的初始OD₆₀₀值为0.01的铜绿假单胞菌GIMT1.074接种到培养基中，所有培养基初始pH值为7.2，液体培养和固体培养温度为30℃，摇床培养时转速均为200rpm，培养时间为40小时。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是光密度法测量菌体浓度方法是：光密度以相应的培养基做空白，在600nm波长下测定菌悬液的吸光度（OD₆₀₀）；样品的浓度超过0.8的时候需要稀释至0.8以下再用所测量的结果与稀释倍数相乘得到菌液的实际OD₆₀₀值。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是恒重干燥法测量菌体浓度方法是：将耐高温的离心管恒重至干重，称量记录，取一定体积不同生理时期不同浓度的菌液，离心，倾去上清液；用无菌蒸馏水冲洗细胞，反复洗涤两次，弃上清，然后将离心管和菌体放置干燥箱中干燥至恒重，称量记录。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是高效液相色谱法是：高效液相色谱法色谱型号为安捷伦高效液相色谱1200，色谱柱型号为Eclipse XDB-C18，4.6×250mm，5μm；流动相采用体积比甲醇:水=4:3，流速1.0mL/min；进样量为10μL，柱温30℃，UV器检测波长280nm。

8.一种多酚污染物生物降解过程中的相互作用，其特征是利用铜绿假单胞菌GIMT1.074降解苯酚和间甲酚混合物的过程中发现：

1)间甲酚的浓度越高对苯酚降解的抑制作用越大，细胞浓度达到同样OD值所用的时间越长，但是在充足的反应时间之后，间甲酚浓度越高，最终细胞浓度越大；同时，间甲酚的浓度越高，完全降解苯酚和间甲酚所需要的时间越长;

2)苯酚的浓度越高，对间甲酚降解具有一定的抑制作用，细胞浓度达到同样OD值所用的时间越短，但是在充足的反应时间之后，苯酚浓度越高，最终细胞浓度越大；同时，苯酚的浓度越高，完全降解间甲酚和苯酚的降解时间越长。