[发明专利]cccDNA标准品及其制备方法、定量检测乙肝病毒cccDNA的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种cccDNA标准品，其特征在于，所述cccDNA标准品包括一个单位的HBV基因组DNA和一个重组位点attR；

所述cccDNA标准品的制备方法，包括如下步骤：首先将一个单位的HBV基因组DNA连接到含有重组位点attB和attP的微环制备载体上，接着采用微环DNA制备技术，attB和attP重新组合后形成attR，从而制备出HBV微环DNA，该HBV微环DNA即为所述cccDNA标准品。

2.一种cccDNA标准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

首先将一个单位的HBV基因组DNA连接到含有重组位点attB和attP的微环制备载体上，接着采用微环DNA制备技术，attB和attP重新组合后形成attR，从而制备出HBV微环DNA，该HBV微环DNA即为所述cccDNA标准品，其中，所述cccDNA标准品包括一个单位的HBV基因组DNA和一个重组位点attR。

3.一种定量检测乙肝病毒cccDNA的试剂盒，其特征在于，包括：

质粒提取试剂盒，用于从待测物中提取DNA；

绿豆核酸酶，用于降解rcDNA；

cccDNA标准品，所述cccDNA标准品包括一个单位的HBV基因组DNA和一个重组位点attR，其中，所述cccDNA标准品通过如下步骤制备：首先将一个单位的HBV基因组DNA连接到含有重组位点attB和attP的微环制备载体上，接着采用微环DNA制备技术，attB和attP重新组合后形成attR，从而制备出HBV微环DNA，该HBV微环DNA即为所述cccDNA标准品；以及

跨越rcDNA两个缺刻的一对引物和一个荧光探针引物。

4.如权利要求3所述的定量检测乙肝病毒cccDNA的试剂盒，其特征在于，所述跨越rcDNA两个缺刻的一对引物和一个荧光探针引物具体为：

上游引物：如SEQ ID No.1所示的DNA序列，

下游引物：如SEQ ID No.2所示的DNA序列，

荧光探针引物：FAM-如SEQ ID No.3所示的DNA序列-TAMRA。