[发明专利]一种抗泡球蚴囊壁组织(生发层、角皮层)单克隆抗体的制备和应用

说明书

本专利公布一种抗泡球蚴囊壁组织(生发层、角皮层)单克隆抗体的制备和应用。多房棘球绦虫的幼虫泡球蚴寄生在人体可引起多房包虫病又称泡球蚴病，其主要寄生在肝脏，常与肿瘤等病变混淆。本发明涉及泡球蚴病的科学研究、诊断和治疗领域，提供了一种鼠源性杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体可与泡球蚴囊壁组织(角皮层、生发层)特异性结合，以及利用此抗体对此种疾病病理组织进行免疫组化特异性染色的方法。抗体效价达到1∶10⁵，并具有很强的敏感性和特异性。此抗体可用于对泡球蚴病进行免疫病理诊断，还可利用该单克隆抗体与化疗药物或放射性核素偶联，制成的靶向药物和诊断试剂，或用于泡球蚴相关的科学研究。

技术领域

本发明属于生物技术及细胞工程领域。涉及分泌抗泡球蚴囊壁组织单克隆抗体的杂交瘤细胞株和由其分泌的抗体，及其在多房包虫病(泡球蚴病)诊断和治疗上的应用。

背景技术

多房包虫病(Multilocular hydatid disease)又称泡球蚴病，是多房棘球绦虫的幼虫泡球蚴寄生在人体所引起的寄生虫病。多房包虫病主要流行于西部地区的牧区和半农半牧区，以新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川西部最为严重。给当地的经济造成了极大的损失。多房棘球绦虫的成虫寄生在狐狸、犬等终宿主的小肠中，当啮齿动物、人吞食随终宿主粪便排出的虫卵，虫卵中的六钩蚴在中间宿主的小肠内孵出并钻入肠壁进入血循环，到达肝脏，发育为泡球蚴。在形态上，泡球蚴为大小不一，直径0.1～1mm的小囊泡集聚而成，囊壁结构分为角皮层和生发层，其角皮层较薄，与宿主组织之间没有很明显的间隔，通过外生性出芽生长和内生性隔膜形成在肝脏中呈浸润性生长，使肝脏遭到广泛破坏。还可经淋巴、血行转移扩散，造成极坏的预后。由于泡球蚴病早期不易被发现，当发生明显的肝功损害时，往往虫体已在肝脏广泛蔓延并发生转移，所以手术切除率仅为20～30％，不经治疗，5年和10年病死率分别为70％和93％，有“虫癌”之称。由于本病的临床表现酷似肝癌，故在诊断中须注意与肝癌的鉴别诊断。

泡球蚴病的诊断及治疗，是流行区各级、各类医疗机构所面临的实际问题。目前的诊断多借助于流行病学史调查、临床表现、影像检查。在临床上虽有B超和各种免疫学实验辅助，但其误诊率依然很高。在大样本的病例报告中术前误诊率为24.3％，前苏联相关报道为26.8％。该疾病的临床确诊，依赖于手术中所取标本的病理学诊断，但现行的病理诊断只是通过对虫体的形态加以辨别来完成，易和单房包虫病及其肝脏肿瘤混淆而误诊。若要确诊，最好使用免疫组织化学的方法。但一直缺乏使用免疫组织化学法所需要的具有很强特异性和敏感性的单克隆抗体，而无法开展。

在针对泡球蚴病进行的科研工作中，也常常需要能和泡球蚴囊壁组织特异性结合的抗体作为研究工具，来确定泡球蚴的定性定位情况。抗泡球蚴单克隆抗体也是进行靶向药物的研究工作中必不可少的工具。

本发明为临床和科研机构提供了抗泡球蚴囊壁组织的特异性单克隆抗体，它既可用于免疫组化试验对病理标本进行临床诊断，也可为包虫研究部门提供便利的研究工具，还可以用作靶向药物的引导结合部位，在多房包虫病的诊断、治疗中有广泛的应用价值。

发明内容

1、本发明的目的是提供能分泌抗泡球蚴囊壁组织(生发层、角皮层)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

2、本发明的另一目的是提供由上述细胞株分泌的抗泡球蚴囊壁组织(生发层，角皮层)的特异性单 克隆抗体。

3、本发明的另一目的是上述单克隆抗体在多房包虫病诊断和治疗上的可能应用。

根据目的一，通过杂交瘤技术采用Balb/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株。其特征为：由泡球蚴囊壁抗原免疫刺激后的Balb/C小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0细胞融合形成的鼠-鼠杂交瘤细胞，能在体外长期生长和稳定传代。能稳定分泌抗泡球蚴囊壁组织的特异性单克隆抗体。其染色体数目见图1。