[发明专利]壳寡糖/细菌纤维素海绵的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种创伤敷料技术领域的方法，具体是一种在木醋杆菌培养基中添加壳聚糖制备吸水性和透湿性更佳、凝血效果更好、生物相容好的壳寡糖/细菌纤维素海绵的方法。

背景技术

在生物医学领域，细菌纤维素由于其独特的生物相容性和生物适应性以及高的持水性和结晶度，在人工血管、医用敷料及组织工程支架的研究越来越多，被认为是目前世界上性能最好的纤维素，因而成为近年来国际上新型生物医学材料的研究热点。

壳寡糖具有良好的水溶性，易被人体吸收，使壳寡糖展现出更独特的功能特性和生理活性。壳寡糖具有抗氧化和抑菌性等多种独特的生理功效。此外，壳寡糖还具有良好的吸水性和透湿性。近年来，壳寡糖作为一种新型的功能性低聚糖，不断引起世界各国研究者的浓厚兴趣。

传统的创伤敷料往往不能兼具吸水性、透湿性、凝血效果和生物相容性都好的特点，因而其应用受到了限制。

经过对现有技术的检索发现，中国专利文献号101288778，公开日2008-10-22，该技术通过将细菌纤维素水凝胶与冰晶充分混合，在–20～–50℃下进行预冻并制成均相分散体系，利用冷冻干燥法制备出细菌纤维素海绵。海绵不良的透湿效果限制了其在临床上的应用。

进一步检索发现，中国专利文献号CN202005908 ,公开日2011-10-12，记载了一种“细菌纤维素膜创可贴”，该专利采用的技术路线是：底层为胶布层，胶布层中间粘贴表面上粘贴细菌纤维素膜，细菌纤维素膜上面为覆盖面膜，胶布层两端粘贴表面上有保护膜，覆盖面膜与胶布层对应部位开有透气孔。其缺点是工艺复杂，吸水性和凝血效果达不到要求。

发明内容

本发明的目的是提供了一种呈三维网状结构，孔隙率高，孔隙致密均匀、吸水性和透湿性更佳，凝血效果更好的壳寡糖/细菌纤维素海绵。

　为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供壳寡糖/细菌纤维素海绵的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）木醋杆菌的活化：活化培养基成分：葡萄糖3% w/v，蛋白胨0.75% w/v，酵母粉1% w/v，磷酸氢二钠0.75% w/v，柠檬酸0.05% w/v；培养基pH 5.0；30℃培养24h；

（2）添加壳寡糖：活化后的木醋杆菌菌种接种到培养基上30℃培养7天，得壳寡糖-细菌纤维素复合物；培养基成分包括壳寡糖、葡萄糖、蛋白胨0.75% w/v、酵母粉1% w/v、磷酸二氢纳0.75% w/v、柠檬酸0.05% w/v，壳寡糖与葡萄糖含量比例为：0.5:2.5～2:1% w/v；

（3）将壳寡糖-细菌纤维素复合物，经蒸馏水漂洗，1%氢氧化钠溶液煮沸4h，室温0.5%乙酸浸泡0.5h，蒸馏水冲洗5次后进行冷冻干燥，得壳寡糖-细菌纤维素海绵。

所述步骤（2）的培养方式是静置培养。

所述木醋杆菌菌种是细菌纤维素高产菌Ax HN001。

所述步骤（3）的冷冻干燥时间是48小时。

采用MTT法检测木醋杆菌的生长周期，筛选出活力最佳时期的木醋杆菌。

所述的MTT法是经过因素筛选的MTT法。

所述的筛选因素是MTT剂量、离心力和作用时间。

所述的筛选方法是正交试验。

所述的检测波长是570nm。

本发明制备得到的壳寡糖-细菌纤维素海绵呈三维网状结构，孔隙率高，孔隙致密均匀。经实验证实，与传统创伤敷料相比，壳寡糖-细菌纤维素海绵的吸水性和透湿性更佳，凝血效果更好，生物相容性检测的细胞毒性为0级，同时原料便宜易得，制备工艺简单。本发明所制备的壳寡糖-细菌纤维素海绵易于实现工业化生产且生物相容性好，在生物医用材料领域将有着广泛的应用。

附图说明

图1细菌纤维素和壳寡糖/细菌纤维素表面的SEM示意图；a：细菌纤维素，b-d：壳寡糖的添加量(w/v%)分别为0.5%、1%和2%；

图2细菌纤维素和壳寡糖-细菌纤维素横截面的SEM示意图；a：细菌纤维素，b-d：壳寡糖的添加量(w/v%)分别为0.5%、1%和2%；

图3细菌纤维素和壳寡糖/细菌纤维素对3T3细胞生长的增值抑制示意图；BC₀：细菌纤维素 ，BC₁、 BC₂ 和BC₃：壳寡糖的添加量(w/v%)分别为0.5%、1%和2%；