[发明专利]一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种甲基营养型芽孢杆菌，其属于芽孢杆菌属，其命名为Bacillusmethylotrophicus；保藏登记号为CGMCCNo.6793，保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间为2012年11月07日。

2.根据权利要求1的甲基营养型芽孢杆菌的发酵方法，所述方法包括下述步骤：

步骤一：菌种活化：将保藏登记号为CGMCCNo.6793的甲基营养型芽孢杆菌菌种接种到LB固体培养基上面，于30℃活化培养48h，所述LB固体培养基配方为酵母浸膏3-5g，蛋白胨8-10g，NaCl 5g，琼脂15～20g，水1000ml，pH 7.4～7.6，连续转接3代，确保菌株纯度后，再接种到种子液中使用；

步骤二：种子液的制备：从LB固体培养基上挑取菌种接种到装有LB液体培养基的三角瓶中，于恒温振荡培养箱中振荡培养，即得到种子液，所述的LB液体培养基配方为：酵母浸膏3-5g，蛋白胨8-10g，NaCl 5g，水1000ml，pH 7.4～7.6；培养条件：30℃，48h；

步骤三：发酵培养：将种子液先后进行种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养，得到发酵液；其中种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养步骤分别如下：

种子罐发酵培养：FJ液体培养基，装料系数0.7，培养条件：35-37℃，42h，接种量：6％，通气量：2.5L/min，搅拌转速：200r/min；

大规模工业发酵培养：FJ液体培养基，装料系数0.7，培养条件：35-37℃，60-70h，接种量：6％，通气量：2.0L/min，搅拌转速：220r/min；

其中在种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养中，种子液的接种量均占液体培养基总量的6-8％；

所述的FJ液体培养基配方为：黄豆饼粉1.5％，蔗糖1％，KH₂PO₄ 0.05％，MgSO₄0.02％，NaCl0.1％，其余为水，所列百分比为重量百分比。

3.根据权利要求2的发酵方法，其中在步骤三的发酵培养过程中滴加敌消泡。

4.根据权利要求2至3任一所述的甲基营养型芽孢杆菌的发酵方法制得的发酵产物。

5.一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂，所述生物菌剂是通过如下步骤制得的：

步骤一：过滤并浓缩产物：将权利要求4的发酵产物用草酸调节pH至6.5-7.0后，将发酵产物通过截留分子量40000-100000k的无机陶瓷超滤膜过滤分离，操作温度为35-37℃，膜通量为50-60LMH，被截留在膜的进液侧的溶液为芽孢溶液，芽孢溶液浓缩倍数为6-7倍，制得经浓缩的芽孢溶液，所述浓缩方法为使用50万Da的分子筛膜，蠕动泵流速为4档，通量为420ml/min，出液口压力为0.08MPa；

步骤二：喷雾干燥：向步骤一的经浓缩的芽孢溶液中添加1.0％的填料，随后将芽孢溶液经喷雾制成粉末，喷雾干燥的进口温度为170-190℃，出口温度为65-85℃，进料速度60mL/min，喷头压力0.10MPa，即得到本发明的甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂；所述填料为白炭黑、微细滑石粉、轻质碳酸钙或2500目超细重钙。

6.根据权利要求5的甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂防治植物病害的用途。

7.根据权利要求6的用途，所述植物病害是烟草、白菜、水稻、棉花作物中的病害。

8.根据权利要求6的用途，所述植物病害是烟草青枯病，白菜腐烂病，水稻白叶枯病、水稻细菌性条斑病或棉花角斑病。