[发明专利]用于检测鸡FMO3基因A1034T突变的引物和探针

权利要求书

1.一种用于检测鸡FMO3基因A1034T突变的特异性引物，其核苷酸序列为：

上游引物FMO3F：5’-GTGCAGGACGACCTCGAT-3’；

下游引物FMO3R：5’CTCCATGAAAGGAAAGGAGTGAGA-3。

2.与权利要求1所述特异性引物配合使用的TaqMan荧光探针。

3.如权利要求2所述的TaqMan荧光探针，其特征在于，其核苷酸序列为：

FMO3-突变型等位基因探针：5’-ATCTTTGCCTCTGGTTAC；

FMO3-野生型等位基因探针：5’ATCTTTGCCACTGGTTAC。

4.如权利要求3所述的TaqMan荧光探针，其特征在于，所述FMO3-突变型等位基因探针的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团NFQ；所述FMO3-野生型等位基因探针的5’端标记荧光报告基团VIC，3’端标记荧光淬灭基团NFQ。

5.含有权利要求1所述引物和权利要求2~4任一所述TaqMan荧光探针的试剂盒。

6.权利要求1所述引物和权利要求2~4任一所述TaqMan荧光探针在制备检测鸡FMO3基因A1034T突变位点试剂盒中的应用。

7.一种检测鸡FMO3基因A1034T突变的方法，其特征在于，

（1）提取待测鸡只的基因组DNA；

（2）采用实时荧光定量PCR技术，以待测鸡只的基因组DNA为模板，用权利要求1所述的引物对和两条探针进行PCR扩增；所述两条探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3~4所示；

（3）应用分析软件对步骤（2）的扩增产物进行基因型判定：如果突变型等位基因探针所标记荧光染料的荧光强度呈S型增长，而野生型等位基因探针所标记荧光染料的荧光强度无S型增长，表示被测样本基因型为TT；如果野生型等位基因探针所标记荧光染料的荧光强度呈S型增长，而突变型等位基因探针所标记荧光染料的荧光强度无S型增长，表示被测样本基因型为AA；如果两种荧光强度均呈S型增长，则被测样本基因型为AT型，是杂合子携带者。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR技术其10μL总工作体系为：

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR技术其PCR反应条件为：95℃预变性10min，1个循环；95℃变性15s，60℃退火1min，共40个循环。

10.权利要求5所述的试剂盒或权利要求7~9所述的检测方法在鸡选育中的应用。