[发明专利]含有检测标签IgG的表达载体、构建方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学实验技术方法领域，涉及一种分子生物学实验技术。更具体地，本发明涉及含有检测标签IgG的表达载体、构建方法及其应用。

背景技术

分子生物学实验中，基因工程方法表达外源蛋白是常用的技术手段，同时该过程必需检测目的蛋白的表达。目前，通常检测目标蛋白的方法是通过蛋白对应的抗体来进行抗原抗体反应，再通过二抗显色来间接确定目的蛋白。这样会产生两个问题：(1)目的蛋白与抗体结合能力不能得到有效保证，抗原与抗体不结合而造成二抗不能有效显色，结果导致假阴性的实验结果，造成实验失败；(2)一些新的蛋白没有相应的抗体来检测，实验无法完成；(3)检测过程涉及到目的蛋白与抗体结合、抗体与二抗结合两步操作，影响检测速度和准确度。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术中检测目的蛋白时可能存在假阴性实验结果、由于缺少抗体无法完成目的蛋白检测以及检测过程繁琐的问题，提供一种含有检测标签IgG的表达载体，从而提供操作简便、结果准确、使用范围广的目的蛋白的检测方法。本发明同时也提供上述表达载体的构建方法及其在目的蛋白的表达及检测中的应用。

本发明要解决的技术问题通过以下技术方案得以实现：提供一种含有检测标签IgG的表达载体，所述检测标签IgG为至少一个种属的IgG的恒定区基因；在表达载体中插入至少一个种属的IgG的恒定区基因得到所述含有检测标签IgG的表达载体。

在上述含有检测标签IgG的表达载体中，所述至少一个种属的IgG的恒定区基因包括人IgG的恒定区基因、兔IgG的恒定区基因、鼠IgG的恒定区基因、羊IgG的恒定区基因、马IgG的恒定区基因、牛IgG的恒定区基因、猪IgG的恒定区基因、猴IgG的恒定区基因、鸡IgG的恒定区基因、鸭IgG的恒定区基因、狗IgG的恒定区基因、熊猫IgG的恒定区基因和狼IgG的恒定区基因。

根据本发明的另一方面，提供含有检测标签IgG的表达载体的构建方法，所述检测标签IgG为至少一个种属的IgG的恒定区基因；所述方法包括以下步骤：

S1、设计所述至少一个种属的IgG的恒定区基因的上游引物和下游引物；

S2、以至少一个种属的cDNA为模板，采用所述上游引物和下游引物进行PCR扩增，得到至少一个种属的IgG的恒定区基因；

S3、将所述至少一个种属的IgG的恒定区基因与表达载体连接，构建成含有检测标签IgG的表达载体。

在上述含有检测标签IgG的表达载体的构建方法中，在所述步骤S3中，所述表达载体包括pET系列表达载体、GST系列表达载体、pTrxA系列表达载体、pCDNA3.1/His C系列表达载体、pCDNA5/FRT/TO系列表达载体、pEGFP-N1系列表达载体和pBudce4.1系列表达载体。

根据本发明的另一方面，提供含有检测标签IgG的表达载体在目的蛋白的表达检测中的应用，所述检测标签IgG为至少一个种属的IgG的恒定区基因；通过所述至少一个种属的IgG的恒定区基因与所述至少一个种属的二抗的直接反应实现所述目的蛋白的表达检测。

上述含有检测标签IgG的表达载体的应用包括以下步骤：

获取至少一个种属的IgG的恒定区基因；构建含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体；获取目的蛋白基因，并将所述目的蛋白基因连接于含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体；将连接有目的蛋白基因、且含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体转染于表达菌株中进行诱导培养，收集表达产物；以及采用所述至少一个种属的二抗进行ECL显色，以检测所述目的蛋白的表达。

上述含有检测标签IgG的表达载体的应用中于，获取至少一个种属的IgG的恒定区基因包括：设计所述至少一个种属的IgG的恒定区基因的上游引物和下游引物；以至少一个种属的cDNA为模板，采用所述上游引物和下游引物进行PCR扩增，获取至少一个种属的IgG的恒定区基因。

上述含有检测标签IgG的表达载体的应用中，构建含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体包括：同时双酶切表达载体和至少一个种属的IgG的恒定区基因；利用DNA电泳同时回收双酶切产生的基因片段和载体片段；以及将所述载体片段和所述基因片段用连接酶进行连接反应，以构建含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体。