[发明专利]一种盐霉素高产菌株

说明书

技术领域

本发明涉属于工业菌株筛选及应用领域，具体涉及到一种盐霉素高产菌株。

背景技术

盐霉素是我国生产、使用和出口的主要兽用抗菌素之一，能有效杀灭家禽体内的各种球虫，广泛用于饲料添加剂，是理想的抗球虫药、饲料添加剂。它是一类由白色链霉菌(Streptomyces albums)产生的一元羧酸聚醚系动物专用抗生素，对大多数革兰氏阳性菌（包括分枝杆菌和一些丝状真菌）以及各种球虫有较强的抑制和杀灭作用。盐霉素是被美国FDA批准的抗球虫剂，已被世界各国广泛应用。

盐霉素是典型的离子载体抗生素，它对细胞中的阳离子，尤其K⁺、Na⁺、Rb⁺的亲和力特别强，使细胞生命活动所必需的阳离子通过膜上脂质屏障的浸透性增强，可自由出入细胞，妨碍细胞内外阳离子的正常传递，使细胞内外离子浓度发生急剧变化，打破离子的正常平衡状态，从而使细胞的渗透压增加，最终使细胞崩解，起到杀菌作用。

目前常用的菌种选育技术（strain improvement）根据其原理可分成随机选育（random screening）和理性选育（rationalized selection）两大类。虽然以分子生物学为基础的基因工程、代谢工程以及由各种组学组成的系统生物学研究为定向构建功能细胞株提供了广阔前景，但要真正实现以这些功能细胞培养来达到改造目标却极其困难。由于微生物体内代谢网络的复杂性和多结点性，基因操作后菌株的代谢流往往并不朝着预期设计的方向转移。尤其是在产生抗生素等次级代谢产物的复杂体系中，要想得到优良的工业生产菌株，主要还是采用随机选育技术。长期以来针对Streptomyces albus菌株改良的随机选育技术中主要是采用的是紫外诱变和LiCl诱变等传统的育种手段，且已取得一定的效果，然而长期使用这些诱变剂处理同一菌种，由于突变的不定向性及突变的累积使得在获得高产的同时菌株在生活能力、产孢量等方面会明显减弱，并且多次诱变往往导致较高的负突变率和抗性饱和，从而使得菌株改善的空间不足。

发明内容

本发明要解决的问题在于提供一种盐霉素高产菌株。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：

一种盐霉素高产菌，分类命名为白色链霉菌(Streptomyces albums) S-610-11，所述菌株保藏编号为CCTCC M 2012492。

盐霉素高产菌，其分类命名为白色链霉菌(Streptomyces albums) S-610-11，该菌株已于2012年12月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：武汉大学武昌珞珈山，保藏编号为CCTCC M 2012492。

本发明所述的盐霉素高产菌(Streptomyces albums) S-610-11的获得方法是：由申请人提供以工业生产菌株F₂-1^#为出发菌株，先经过常压常温等离子体（ARTP）诱变处理获得突变株，然后通过高通量筛选技术得到高产突变株，最后通过摇瓶验证、传代培养获得遗传性稳定的盐霉素高产菌。

本发明所述菌株的形态学、生理生化及碳源利用特征如下：

  本发明菌株的形态学及生理特征                                                

本发明所提供的盐霉素高产菌株的选育方法，具体步骤如下：

（1）利用常温常压等离子体（ARTP）诱变出发菌株

制备出发菌株的孢子悬浮液，并在无菌风下吹干，然后置于ARTP诱变系统中进行等离子体照射1～10min。将样品用生理盐水洗下，梯度稀释后涂布在平板培养基上，避光培养5～8d。

（2）突变株高通量初筛

挑取步骤（1）所得的单菌落突变株同时用无菌牙签点接种于两块分别装有1～6ml固体培养基和0.3~1.5ml液体发酵培养基的24、48或96孔板中，前者25～30℃静置培养4～8d,后者25～37℃、湿度50～90%、200～300r/min培养4～8d。培养后，检测各孔中发酵液的盐霉素含量，挑出产素水平高于出发菌株30%的突变株，即为初筛高产菌株。

（3）突变株高通量复筛