[发明专利]一种测定石斛生物碱含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分光光度比色法定量测定物质含量领域，具体涉及一种测定石斛生物碱含量的方法。

背景技术

生物碱是一类存在于生物体内具有生理活性的含氮碱性有机物。植物生物碱是植物在长期的生态环境适应过程中为抵御动物、微生物、病毒及其它植物的攻击而形成的一大类次生代谢产物。生物碱在医药、植物的生长、发育、共生和繁殖过程中具有重要意义。我国早在二三千年前就使用含生物碱的中草药进行治疗，在《神农本草经》 就记载有多种含生物碱的中草药，如上品的黄连、石斛。石斛生物碱是石斛药材中最重要的活性成分之一，也是最早分离并进行结构确认的化合物。石斛生物碱的含量多以溴甲酚绿酸性染料比色法测定，这是一种间接萃取比色测定法。由于石斛属植物生物碱含量一般比较低，目前常用的溴甲酚绿酸性染料比色法测定得出率较低，且测定耗时较长。

发明内容

针对目前常用的溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱得出率低，且测定耗时长的问题，本发明的目的是提供一种测定石斛生物碱含量的改良方法，以提高石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，缩短测定时间。

本发明实现发明目的采用如下技术方案：

一种测定石斛生物碱含量的方法，以石斛干品为原料，包括以下步骤：

（1）将石斛干品磨成粉末得物质A；

（2）取物质A0.2g，用10～15重量倍体积浓度为25-28%的浓氨水润湿后于圆底烧瓶中密塞40 min，加氯仿10 mL，称重，圆底烧瓶接入冷凝管，置80℃水浴中加热回流2 h，冷却后补充氯仿至原重，定性滤纸过滤，得续滤液B；

（3）将步骤（2）获得的续滤液B加氯仿定容至10 mL，加入pH4.5的2M邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液5 mL和体积浓度0.04%溴甲酚绿溶液1 mL，并添加体积比1:60的吐温-80水溶液0.4 mL，在振荡器上振摇3 min，静置10 min，定性滤纸过滤氯仿层，得续滤液C；

（4）将步骤（3）获得的续滤液C加0.01mol/L氢氧化钠-无水乙醇溶液1 mL，摇匀，于620nm波长处测定吸光度；生物碱含量计算公式如下：

本发明与已有技术相比，其有益效果体现在：

本发明将待测石斛干品粉碎后，用碱性氯仿水浴回流提取生物碱，测定液中添加非离子表面活性剂吐温-80，溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱含量。本发明在石斛生物碱测定体系中，添加适量的吐温-80，主要是利用它对提取溶剂有促进渗透的作用以及对提取的有效成分产生增溶作用。在适宜pH条件下，石斛碱盐的阳离子RH⁺与溴甲酚绿阴离子In^- 结合成的离子缔合物RH⁺ ·In^- 定量被氯仿萃取，加入非离子表面活性剂吐温-80，阴离子染料In^- 被增溶，改变了体系中各物质在两相的分配，增加了溴甲酚绿-氯仿萃取率，提高了石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，缩短测定时间。该方法操作简便，重现性好，测定结果稳定。

附图说明

图1是本发明测定方法流程示意图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式对本发明做进一步的说明。

实施例1  取0.2g的石斛干品，磨成粉末，用10～15重量倍体积的浓氨水润湿后于圆底烧瓶内密塞40 min，加氯仿10 mL，称重，圆底烧瓶接入冷凝管，置80℃水浴锅中加热回流2 h，圆底烧瓶回流液冷却至室温后补充氯仿至原重（因加热回流氯仿蒸发），定性滤纸过滤，续滤液加氯仿定容至10 mL。滤液中加入pH4.5的0.2M邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液（即苯二甲酸氢钾和氢氧化钠浓度匀为0.2M）5 mL和体积浓度0.04%溴甲酚氯溶液1 mL，并添加0.4 mL 体积比1:60的吐温-80水溶液（1体积的吐温-80：60体积水），在振荡器上振摇3 min，静置10 min，定性滤纸过滤氯仿层，续滤液加质量分数0.01mol/L氢氧化钠-无水乙醇溶液1 mL，摇匀，以氯仿10 mL同样操作做空白对照，于620nm波长处测定吸光度。整个测定方法步骤如图1所示。试验结果如表1所示。

表1吐温对石斛类原球茎生物碱含量测定的影响

由表1可知，生物碱含量测定体系中添加吐温-80的吸光度值明显增高。

实施例2，操作方法同实施例1，不同之处为通过加入不同体积的吐温-80测定吐温添加量对石斛类原球茎生物碱含量测定的影响，结果如表2所示。