[发明专利]一种抗血循型蛇毒鸡卵黄抗体及其应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种血循型蛇毒鸡卵黄抗体（Immunoglobulin-yolk，IgY）及制备方法与应用。具体而言，是基于血循型蛇毒锌离子金属蛋白酶活性基序多肽免疫，制备抗血循型蛇毒鸡卵黄抗体的制备方法。

（二）背景技术

长久以来，毒蛇咬伤给人们的生产生活带来了严重危害，据世界卫生组织网站公布的数字显示：全世界每年被蛇咬伤的人数有250多万人，导致死亡人数高达12.5万人。我国每年毒蛇咬伤患者达10多万人次，其中约73％为中青年，死亡率为5％～10％，蛇伤致残丧失劳动能力者占25％～30％。可见毒蛇是危害人类健康的一个重要生物安全隐患，必须采取相关措施，降低或消除相关风险。

注射抗蛇毒血清是目前世界公认的最有效的治疗方法，但蛇毒本身成分复杂，含有数百种功能各异的蛋白质，用全毒免疫产生的抗蛇毒血清不仅含有能中和毒素成分的抗体，也含有大量针对蛇毒中其他非毒素成分的抗体。这不仅使得抗血清的临床使用剂量大大增加，增加了过敏反应概率，也浪费了宝贵的血清资源（Wagstaff S C, Laing G D, Theakston R D, et al. Bioinformatics and multiepitope DNA immunization to design rational snake antivenom. PLoS Med, 2006, 3:184.）。如果能够将蛇毒中的主要毒性致死成分分离、纯化，制备单克隆抗体，则其中和相应蛇毒蛋白能力将极大提高，抗体用量减少，不良反应也可相应减少，而且其抗体生产成本也将极大降低，质量也可得到稳定控制。检索相关文献，已有不少有关蛇毒蛋白单克隆抗体的成功制备（尹惠琼. 利用噬菌体展示文库技术制备抗蛇毒ScFv抗体. 云南大学,2004硕士论文.; 李丽红等. 眼镜王蛇毒单克隆抗体的制备. 细胞与分子免疫学杂志,2009,25(3):236-238.等）但绝大部分仅局限于毒蛇分类鉴定和基础理论研究上；这极可能是由于蛇毒毒性成分的多样性（贾艳等. 蛇毒的毒性成分及其应用研究.蛇志,2004,16(2):23-32.），因此至今几乎没有一种单克隆抗体能够完全中和某种蛇毒毒性。

尖吻蝮蛇( Deinagkistrodon acutus)是我国常见的毒蛇，属于蝰科蝮亚科，又名五步蛇（浙江），棋盘蛇（福建），百步蛇（台湾），主要栖息于越南北部，老挝和中国南部地区，其毒液主要为血循毒（Li QB, Yu QS, Huang GW, et al. Hemostatic disturbances observed in patients with snakebite in south China. Toxicon. 2000, 38(10):1355-1366. Chen CC, Yang CM, Hu FR, et al. Penetrating ocular injury caused by venomous snakebite. Am. J. Ophthalmol. 2005, 140(3): 44- 546.）。患者被咬伤后，伤口局部红肿、疼痛剧烈，流血不止，肿胀迅速，毒素向肢体上端蔓延，常有水泡、淤斑出现。中毒严重者还会出现血压下降、心律失常、少尿、无尿，最后因循环衰竭而导致死亡。研究表明，蛇毒金属蛋白酶（Wagstaff S C, Laing G D, Theakston R D, et al. Bioinformatics and multiepitope DNA immunization to design rational snake antivenom. PLoS Med, 2006, 3:184）是引起出血、致死等症状的主要物质，它们有的干扰伤口血液的凝结和血栓的形成，有的则降解胞外基质或基底膜，可占总蛇毒蛋白的60%以上，是蛇毒蛋白中的主要成分；能够有效中和这些金属蛋白酶，则基本可以有效缓解五步蛇毒对机体的损伤。