[发明专利]一种用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的试剂及应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的试剂及应用方法，属于动物基因工程和生物化学领域。

背景技术

核糖核酸（ribonucleic acid，简写为RNA）是生物细胞中的遗传信息载体，普遍存在于动物、植物、微生物及某些病毒和噬菌体内，也是基因工程中研究基因表达以及克隆目的基因等过程需要操作的重要生物大分子。由于RNA极不稳定，容易发生特异性或非特异性降解，所以在实验过程中通常选用新鲜的样本并且立刻提取纯化RNA，这极大地增加了实验的复杂程度并降低了样品收集和处理的效率。因此，研究人员也开发了不同的方法直接保存新鲜样本，以便以后提取完整的RNA。

针对动物的肌肉组织而言，直接保存样本以便之后提取RNA的方法主要有两类。第一种方法是样品采集后直接放入液氮保存。这种方法对于这对样本的采集时间和保存具有很大的限制性，尤其体现在对于特殊设备的需求上，例如液氮罐。如果不能将新鲜采集的肌肉样本立刻至于液氮中，除了RNA分子可能发生降解之外，由于应激反应产生新的RNA都可引起RNA状态的改变，给后续的实验带来操作误差。第二类方法是将采集的组织样品置于市售的RNA保存液中，室温短期保存或者低温长期保存。但是，商品化的组织RNA保存液价格较为昂贵，且使用量较大，一般是样本体积的5-10倍，极不经济。目前使用的可以手工配制的组织RNA保存液的配方均为含有多种盐类水相体系，例如柠檬酸钠，硫酸铵，异硫氰酸胍，乙二胺四乙酸等。其不但配制复杂，成本较高，而且水相体系还存在样品浸润时间较长的问题，一般需要在4摄氏度下放置24小时，使用不方便。因此，研究和开发用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的试剂及应用方法具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的试剂及应用方法。利用本发明所述的有机相试剂能够实现快速浸润和处理肌肉组织样品，达到高效而经济的保存其中RNA组分的目的。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的保存液，所述保存液由乙醇、甲醇和三氯乙酸配比而成，其特征在于：所述乙醇含量以体积百分比计占保存液总体积的95~99%，所述甲醇含量以体积百分比计占保存液总体积的1~5%，所述三氯乙酸含量以质量百分比计占保存液总质量的0.1~1%。

上述用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的保存液中：所述保存液中乙醇含量以体积百分比计优选占保存液总体积的96.5~98%，所述甲醇含量以体积百分比计优选占保存液总体积的2~3.5%，所述三氯乙酸含量以质量百分比计优选占保存液总质量的0.2~0.35%。

为实现上述目的，本发明还提供了一种用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的浸润液，所述浸润液由甲醇和乙醇配比而成，其特征在于：所述甲醇含量以体积百分比计占浸润液总体积的90~99%，所述乙醇含量以体积百分比计占浸润液总体积的1~10%。

上述用于保存动物肌肉组织中核糖核酸的浸润液中：所述浸润液中甲醇含量以体积百分比计优选占浸润液总体积的95~98%，所述乙醇含量以体积百分比计优选占浸润液总体积的2~5%。

为实现上述目的，本发明提供了一种保存动物肌肉组织中核糖核酸的方法，步骤是：将新鲜采集的动物肌肉样品切成粒径不大于10mm的块状，用其等体积量的上述的浸润液冲洗1-2次，然后转到体积量为其体积2-5倍的浸润液中，室温放置0.5-2小时；之后过滤除去浸润液；将除去浸润液的样品置于含有其3-10倍体积量的上述保存液的瓶中，密封瓶口，常温下保存动物肌肉组织24-48小时；或4℃保存动物肌肉组织1-2周；或者置于液氮中保存动物肌肉组织1-1.5年。

其中，上述保存动物肌肉组织中核糖核酸的方法中：所述样品优选切成粒径为4-5mm的块状。所述用于浸润样品的浸润液使用体积量优先选择样品体积的3-4倍，室温放置时间优选为1-1.2小时。所述用于保存样品的保存液使用体积量优先选择样品体积的5-8倍。

基于上述保存动物肌肉组织中核糖核酸的方法，在对保存的动物肌肉组织进行RNA提取之前，可直接过滤除去保存液，实施总RNA提取。