[发明专利]从马齿苋中提取吲哚啉类酰胺生物碱的工艺及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及从中药材马齿苋中富集提取吲哚啉类酰胺生物碱的工艺，以及该吲哚啉类酰胺生物碱的检测方法，属于药学领域。

背景技术

马齿苋(Portulaca oleracea L.)为马齿苋科一年生肉质草本植物，其资源丰富，广布于全世界温带和热带地区，其地上部分在我国和印度、土耳其、埃及、希腊等许多国家作为传统药食两用植物使用。我国历代本草医书多有记载，具有清热解毒、凉血止血的功能，用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫叮咬、便血、痔血和崩漏下血。现代药理研究表明马齿苋具有抗菌、松弛骨骼肌、兴奋子宫、抗炎镇痛、促进伤口愈合、抗动脉粥样硬化、降血脂、降血糖、抗癌、抗氧化、抗衰老和神经保护等多方面作用。

除了有机酸、黄酮、香豆素和萜类等次生代谢产物，生物碱是马齿苋中一类重要的化学成分，而且其结构类型众多。如马齿苋地上部分含有去甲肾上腺素、多巴胺、多巴、腺苷、尿嘧啶、腺嘌呤、2,5-二羧基吡咯、5-羟基-2-羧基吡啶、N，Ｎ-二环己基脲、尿囊素；二酮哌嗪类酰胺生物碱如环(亮氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-酪氨酸)、环(丙氨酸-亮氨酸)、环(丙氨酸-异亮氨酸)、环(苯丙氨酸-异亮氨酸)、环(酪氨酸-丙氨酸)、环(酪氨酸-亮氨酸)和环(酪氨酸-异亮氨酸)；四氢异喹啉类酰胺生物碱如马齿苋酰胺E；以及吲哚啉类酰胺生物碱马齿苋酰胺A、B、C、D、F、G等。在这些生物碱中，吲哚啉类酰胺生物碱马齿苋酰胺A、B、C、D、F、G(Oleracein A-G)是申请人从马齿苋中分离得到的结构新颖的酰胺类生物碱[Xiang L,Xing DM,Wang W，et al.Alkaloids from Portulaca oleracea L.,Phytochemistry，2005,66(21):2595-2601;Liu DY，Shen T,Xiang L.Two antioxidant alkaloids from Portulaca oleracea L.,Helvetica Chimica Acta,2011,94:497-501]，其结构如下：

目前针对该吲哚啉类酰胺生物碱单体化合物的提取分离方法及利用HPLC/MS/MS的检测方法已有报道，但富集制备总吲哚啉类酰胺生物碱提取物的工艺及提取物的TLC和HPLC指纹图谱检测方法尚无报道。

申请人的前期研究工作表明，该吲哚啉类酰胺生物碱具有显著的清除自由基作用(Yang ZJ,Liu CJ,Xiang L,et al.Phenolic alkaloids as a new class of antioxidants in Portulaca oleracea.Phytotherapy Research,2009,23(7):1032-1035)和体外神经保护活性(向兰,杨子娟.马齿苋酰胺类生物碱在制备抗氧化和神经元保护剂中的应用.CN,200810014427.1[P].2008-03-05)。鉴于此类结构新颖的吲哚啉类酰胺生物碱及其衍生物在药理活性方面具有潜在的研究价值，在马齿苋药材质量控制方面具有潜在的应用价值，在如AD和PD等神经退行性疾病预防和治疗方面具有潜在的应用价值，本发明旨在报道从马齿苋中大量富集吲哚啉类酰胺生物碱提取物的制备工艺及其TLC和HPLC检测方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了两种从中药材马齿苋中富集提取吲哚啉类酰胺生物碱提取物的工艺，并提供了该吲哚啉类酰胺生物碱提取物的检测方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种从中药材马齿苋中提取吲哚啉类酰胺生物碱的工艺，包括以下步骤：

（1）取干马齿苋，用6倍量（重量倍数）60%乙醇（体积百分数）回流提取3次，每次1h；合并提取液，浓缩至0.5g生药/ml；

（2）上述提取液加于2倍体积的大孔树脂上，按4BV/h的流速进行吸附，先用10BV的水洗脱，再用4.5BV的10%乙醇（体积百分数）洗脱，再用4.5BV的30%乙醇（体积百分数）洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，得浓缩液；

（3）上述浓缩液加于步骤（2）所述的提取液1倍体积的聚酰胺柱上，依次用5BV的水、3BV的70%乙醇洗脱，再用3BV的氨水洗脱（氨水质量浓度为0.25%～25%），收集氨水洗脱液，减压浓缩干燥，得氨水洗脱物；