[发明专利]一种利用微波逆流技术提取驴蹄草中驴蹄草内酯的方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种驴蹄草内酯的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附-柱层析耦联技术富集纯化驴蹄草中驴蹄草内酯的方法。

背景技术：

驴蹄草：英文名Herb of Membranaceous Marshmarigold，别名：驴蹄菜、立金花。多年生草本，高20-48cm，无毛，须根肉质。茎直立，实心，具细纵沟，中部或中部以上分枝，稀不分枝。基生叶3-7，草质，有长柄；柄长7-24cm；叶片圆形、圆肾形或以形，长2.5-5cm，宽3-9cm，先端圆，基部深心形，边缘密生小牙齿；茎生叶较小，具短柄或无柄。单超支聚伞花序生于茎或分枝顶端，通常有2朵花；花梗长2-10cm；花两性，直径1.6-3.2cm；萼片5，花瓣状，黄色，倒卵形或狭倒卵形，长1-1.8cm，宽0.6-1.2cm，先端圆；花瓣无；雄蕊多数，长4.5-7mm，花丝狭线形，花药长圆形，长1-1.6mm；心皮7-12，与雄蕊近等长，无柄，花柱短，蓇葖果，长约1cm，宽约3mm，有横脉纹，喙长约1mm。种子多数，狭卵球形，长1.5-2mm，黑色有光泽，具少数纵皱纹。花期5-9月，果期6-10月。化学成分：全草含紫堇块茎碱(corytuberine)，木兰花碱(magnoflorine)，烟碱(nicotine)，驴蹄草内酯(caltholide)，表驴蹄草内酯(epiacltholide)等成分。

驴蹄草内酯是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注。经科学研究及临床应用证明，驴蹄草内酯具有清热利湿，解毒。用于中暑，尿路感染；外用治烧烫伤，毒蛇咬伤。近年来，人们发现天然植物驴蹄草中含有大量的驴蹄草内酯，从中提取驴蹄草内酯并且取得了可喜进展，原料驴蹄草来源较广。

发明内容：

本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用微波逆流提取大孔树脂吸附-柱层析耦联技术富集纯化驴蹄草中驴蹄草内酯的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种利用微波逆流提取-大孔树脂吸附-柱层析联用技术富集纯化驴蹄草中驴蹄草内酯的方法，其步骤如下：

(1)将干驴蹄草粉碎后，加入纯水混合，进行微波逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，微波功率在400～800W，萃取时间为60min～120min；萃取温度为50～60℃，萃取三次，过滤，合并滤液，得到提取液；

(2)将经步骤(1)处理的驴蹄草提取液抽滤，得提取液并减压浓缩得驴蹄草初提物：

(3)将所获初提物用水加热溶解，加入乙酸乙酯萃取，静置、抽滤、减压浓缩得驴蹄草内酯粗提物；

(4)将所得驴蹄草内酯粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；

(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集驴蹄草内酯各阶段洗脱液；

(6)将驴蹄草内酯各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得驴蹄草内酯半成品，其含量在20％以上；

(7)将所得驴蹄草内酯半成品溶于乙酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以乙醇、乙醚以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集驴蹄草内酯各阶段洗脱液；

(8)将所收集的驴蹄草内酯洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得驴蹄草内酯，其含量在70％以上。

所述的步骤(1)中，驴蹄草粉碎后过60～80目筛。

所述的步骤(1)中，加入纯化水的体积为驴蹄草粉碎体积的8～10倍。

在所述的步骤(3)中，加入乙酸乙酯的量按体积计算为提取物溶解后的10～20倍。

所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。

所述的步骤(5)中所述的洗脱为用10～90％的乙醇进行洗脱。

所述的步骤(5)和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。

所述的步骤(7)中所采取的乙醇与乙醚的体积为1～5∶1。