[发明专利]一种利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法

权利要求书

1.一种利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、消毒烟草种子的步骤；

B、培育无菌种子苗的步骤；

C、剪切无菌种子苗的步骤：

D、配置若干待选生根培养基的步骤；

E、筛选最优生根培养基的步骤。

2.根据权利要求1所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤A具体为：

选取籽粒饱满的未包衣的烟草种子120～150粒置于培养皿中，加入经质量百分比浓度为75％乙醇浸泡30s，用无菌水冲洗3次；再用质量百分比浓度为0.1％HgCl₂溶液浸泡5～7min，再用无菌水冲洗4～5次，即获取消毒的烟草种子。

3.根据权利要求1所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤B具体为：

用无菌镊子将步骤A所得消毒的烟草种子接种于含蔗糖1.5～3％、琼脂0.3～0.5％、pH5.6～6.0培养基的培养皿中，种子间距0.5～0.7cm，培养皿中的培养基上表面距培养皿上盖的距离控制在1.2～1.5cm，培养基在121℃湿热灭菌15-20min；最后将接种好的培养皿置于25-28℃、12h光照/d、无菌环境中培养7～10d；得无菌种子苗，直至无菌种子苗的两片子叶触到培养皿上盖。

4.根据权利要求1所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤C具体为：

无菌种子苗的两片子叶触到培养皿上盖时，在超净工作台内用无菌剪刀沿无菌种子苗茎基部剪断，使带子叶部分长度控制在1.0～1.2cm，然后置于干燥无菌的滤纸上备用。

5.根据权利要求1所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤D具体为：

配制若干待选的生根培养基，培养基硬度以无菌种子苗茎部能顺利进入为准，然后分别装入250mL的三角瓶中，每瓶50mL，在121℃湿热灭菌15～20min，灭菌后从灭菌锅中取出培养皿置于超净工作台令其冷却凝固；用无菌水湿润无菌枪型镊子顶部，然后用湿润后镊子的顶部吸附无菌滤纸上的无菌种子苗绿色子叶，将其夹取到三角瓶内培养基的正中央，使无菌种子苗的茎1/3部分浸入培养基中，完成后用封口膜封口，于25～28℃、12h光照/d培养条件下，培养14d以上。

6.根据权利要求1所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤E具体为：

根据烟苗根是否长进生根培养基中，以及生根培养基中根的长度、数量、根系活力及干物质积累量的情况，鉴定出适合于烟草的最佳生根培养基。

7.根据权利要求3所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤B中进一步包括配置培养基的步骤：

以配置1L培养基为准：先在烧杯中放入蒸馏水，接着称取20～30g蔗糖倒入烧杯，搅拌溶解，再加蒸馏水用量筒定溶至1L；用1mol/LHCL或1mol/L NaOH调节pH5.6～6.0；然后称取3～5g琼脂粉(强度：1300g/cm²)，倒入上述配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂粉熔化，稍微冷却后，分装入培养皿中，再装入培养基，培养基上表面距培养皿上盖的距离控制在1.2～1.5cm，接着放入消毒灭菌锅灭菌，在121℃湿热灭菌15～20min，灭菌后从灭菌锅中取出培养皿置于超净工作台令其冷却凝固。

8.根据权利要求5所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤D中配置的若干待选的生根培养基为：

1/2MS、1/2MS+0.5g活性炭、1/2MS+1.5g活性炭、1/2MS+2.5g活性炭、MS、MS+0.5g活性炭、MS+1.5g活性炭、MS+2.5g活性炭。

9.根据权利要求8所述利用烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法，其特征在于，步骤D中若干待选的生根培养基中进一步添加有生长激素NAA0.1-0.3(mg/L)。

10.一种如权利要求1-9任一所述烟草无菌种子苗筛选生根培养基的方法在筛选其他植物的不定芽生根培养基中的应用。