[发明专利]一种亲和层析纯化乌司他丁的方法有效
申请号: | 201210598001.1 | 申请日: | 2012-12-30 |
公开(公告)号: | CN103073638A | 公开(公告)日: | 2013-05-01 |
发明(设计)人: | 刘冠男;林晓磊;刘翠珍;王议锋 | 申请(专利权)人: | 青岛九龙生物医药有限公司 |
主分类号: | C07K14/81 | 分类号: | C07K14/81;C07K1/22;C07K1/18 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 266100 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 亲和 层析 纯化 方法 | ||
1.一种纯化乌司他丁的方法,该方法包括:将乌司他丁粗品通过离子交换层析、超滤液沉淀、沉淀物冻干步骤进行纯化,所得纯化后的乌司他丁的总收率提高到70%以上,总效价不低于5000iu/mg。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述乌司他丁粗品是通过以男性尿液为原料,将原料依次经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析制备得到的。
3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述吸附柱层析包括如下步骤:
(1)用洗脱液A溶解乌司他丁粗品,搅拌、离心,留取离心液,所述洗脱液A为0.01-0.3moL/L的醋酸盐缓冲液;
(2)用洗脱液B平衡吸附柱,将上述离心液上柱,洗脱液B为0.01-0.5moL/L醋酸钠和0.1-5moL/L NaCl的缓冲液;
(3)用洗脱液B洗脱吸附柱,收集洗脱液;
(4)用洗脱液C平衡亲和层析柱,将超滤液上柱,洗脱液C为0.01-0.5moL/L甘氨酸和0.1-5moL/L NaCl的缓冲液;
(5)上样结束后,用洗脱液C洗脱,收集洗脱液;
(6)柱中的亲和树脂经洗脱液C洗脱后,用洗脱液D洗涤去除吸附在上面的杂质,密封待用,洗脱液D为0.01-0.3moL/L盐酸和0.1-5moL/L NaCl的缓冲液;
(7)将洗脱液经超滤膜,加入磷酸盐缓冲液反复超滤,得超滤液。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.5moL/L。
5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述吸附柱为阴离子交换柱。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述阴离子交换柱包括:强阴离子交换柱Q-Sephadex A-25,Q-Sephadex A-50,Q-Sephadex C-25,Q-Sephadex C-50;弱阴离子交换柱DEAE-Cellulose DE-22,DEAE-Cel lulose DE-23,DEAE-Cel lulo se DE-51,DEAE-Cel lulose DE-52,DEAE-Cellulose DE-53。
7.如权利要求7所述的方法,其特征在于:所述亲和层析柱包括:CM-Sephadex A-25,CM-Sephadex A-50,CM-Sephadex C-25,CM-Sephadex C-50,SP-Sepharose2B,SP-Sepharose4B,SP-Sepharose6B,SP-Sepharose CL-2B,SP-Sepharose CL-4B,SP-Sepharose CL-6B。
8.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述超滤液沉淀步骤包括:超滤液中加入乙醇沉淀。
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