[发明专利]乙酸铵提纯尿促性素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，利用尿促性素蛋白质溶于一定浓度盐溶液中的特性，采用低温条件下乙酸铵溶液提纯尿促性素，乙醇沉淀，最后用丙酮脱水得尿促性素提纯物。

背景技术

尿促性素(HMG)是由人脑下垂体前叶部分分泌的一种糖蛋白促性腺激素，一般是从绝经期或绝经期后妇女的尿液中经提取纯化而制得。妇女在行经期间HMG的含量有所波动，但较低，只有妇女进入绝经期或之后的十几年中，其尿中HMG的含量方达到高峰(60-100iu/L尿)，并能维持在一个稳定的水平上，HMG含有卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)，其所含比例近似1∶1。临床主要用于治疗妇女因功能性不排卵所致的不育症；男性因激素水平低下所引起的精子过少或活力不足。另外，还用于治疗诸如妇女闭经、月经不调、男女性机能失调等症。

1928年Ascbheim首先报道了从更年期妇女尿液中发现了活性物质，之后报道虽不少，但真正对HMG的了解和制备，是从20世纪60年代的Donimi开始，并逐渐形成比较规范化的工艺来制备的。我国从20世纪70年代开始研究，80年代正式进入临床试验阶段，90年代开始大量生产。

在实际生产中，由于尿促性素粗品中杂质成分过多(有效成分少于10％)，如果尿促性素粗品直接通过柱吸附纯化，会增加树脂使用量，因树脂价格昂贵，造成生产成本升高。且在吸附操作过程中，杂质易堵塞柱体，甚至可能发生柱体胀裂的危险。本发明针对这些问题，提出了用乙酸铵提纯尿促性素粗品的技术方法，提纯后的尿促性素除出了80％的杂质，在后续协和树脂吸附过程中不仅节约了树脂的使用量，避免了柱体胀裂的危险，还节约了整个工序的时间。

发明内容

本发明提出的乙酸铵提纯尿促性素的具体方法，包括以下步骤：

1)5％-20％乙酸铵溶液的配制：将50g-200g乙酸铵溶解于1000ml 70％的乙醇溶液中，即得5％-20％的乙酸铵溶液。

2)将尿促性素粗品按1g-3g∶15ml-35ml比例加入5％-20％的乙酸铵溶液中，在0-20℃条件下搅拌0.5-4.5小时，离心，留取上清液。

3)离心渣按1g-3g∶15ml-30ml比例加入5％-20％的乙酸铵溶液，在0-20℃条件下搅拌0.5-4.5小时，离心，留取上清液。

4)合并两次上清液，按1ml-2ml∶1.5ml-4.5ml比例加入95％乙醇，搅拌30-60分钟，置低温0-20℃下静置10-24小时。

5)离心，收集沉淀物，用适量丙酮脱水，离心，将沉淀物置有五氧化二磷作吸水剂的真空干燥箱中干燥，得尿促性素提纯物。

本发明公开了乙酸铵提纯尿促性素的技术方法，其优点和积极效果在于尿促性素粗品经过乙酸铵溶液溶解、乙醇沉淀，丙酮脱水后，可以有效去除尿促性素粗品中的杂质成分，使其在树脂处理过程中节约树脂用量，降低生产成本，另外还可以避免因尿促性素粗品杂质过多导致堵塞柱体、甚至发生柱体胀裂危险的隐患。

具体实施例

1)7％乙酸铵溶液的配制：将70g乙酸铵溶解于1000ml70％的乙醇溶液中，即得7％的乙酸铵溶液。

2)将400g尿促性素粗品加入15L的7％的乙酸铵溶液中，在10℃条件下搅拌3小时。离心，留取上清液。

3)离心渣加入8L的7％的乙酸铵溶液，在10℃条件下搅拌2小时。离心，留取上清液。

4)合并两次上清液，加入40L的95％乙醇，搅拌50分钟，置低温10℃下静置过夜。

5)离心，收集沉淀物，用适量丙酮脱水，离心，将沉淀物置有五氧化二磷作吸水剂的真空干燥箱中干燥，得尿促性素提纯物120g。

本发明的优点和积极效果

120g尿促性素提纯物再经后续协和树脂吸附工序，与400g尿促性素粗品直接通过协和树脂吸附，进行了操作时间、成本、成品效价的对比试验，结果见下表：

通过比较，充分证明了本发明相对于传统技术的优势，不仅在效价方面略胜一筹，还去除了杂质，节省了后续协和工序中的树脂用量，节省整个工序的时间，从而降低生产成本。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容、依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。