[实用新型]磺胺类药物ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测磺胺类药物残留量的试剂盒，特别是检测动物组织（肌肉/鱼/虾）、鸡蛋、饲料、尿液中磺胺类药物残留量的酶联免疫检测（ELISA）试剂盒，ELISA（Enzyme Linked Immunosorbnent Assay）是酶联免疫吸附剂测定的简称，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术。 

背景技术

磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是一类具有对氨基苯磺酰胺结构、用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。因具有广谱、稳定、经济、易用以及联合抗菌增效剂效果可提高数十倍的特点，常以亚治疗浓度的药物做为饲料添加剂来预防疾病的发生，提高饲料的转化率和促进动物生长，其中常用的SAs就有十几种。但该类药物存在严重副作用，人体中长期存在会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性，且有潜在的致癌性，因此已引起了国内外的高度重视。我国以及美国、欧盟等国家规定了动物性食品中总磺胺以及单个磺胺的最高残留限量（MRLs）为0.1mg/kg，其中磺胺二甲基嘧啶（SM2）的MRLs为0.025μg/ml。 

目前，磺胺类药物残留的检测方法主要有微生物学法、理化分析方法和免疫法等。微生物学法简便、费用低，但操作费时且敏感性、特异性都较差，在定性定量上都存在困难，不能满足现代残留检测的需要，甚至有些检测结果还达不到最高残留限量的要求；理化法常作为确证方法用于测定动物组织中的药物残留，如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）、气-质联用（GC-MS）、液-质联用（HPLC-MS）等，这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国畜禽养殖户、屠宰场、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。 

实用新型内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的磺胺类药物残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中磺胺类药物残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。本实用新型可以检测15种磺胺类药物。 

本实用新型的技术方案是：一种磺胺类药物ELISA检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一 份质检报告，其特征在于：酶标板时采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上预包被磺胺类药物偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别为7瓶标准品溶液、酶标二抗、抗体工作液、显色液A液、显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液，下凹瓶位共15个。 

酶标板由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，放入真空铝箔袋中，盒体为硬纸盒，下凹瓶位由塑料泡沫制成，以塑料硬膜为盖板膜，盖板膜大小与酶标板横切面大小一致，将14瓶试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶盛装并固定在下凹瓶位中，与酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质控报告一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。14瓶试剂分别为7瓶1ml标准品溶液、12ml酶标二抗、7ml抗体工作液、7ml显色液A液、7ml显色液B液、7ml终止液、40ml浓缩洗涤液、50ml浓缩复溶液。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定（包括标准分析孔），既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中的磺胺类药物将和酶标板微孔条上预包被的磺胺类药物偶联抗原竞争抗磺胺类药物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与样本中磺胺类药物的残留量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中磺胺甲基异噁唑的残留量，再利用交叉反应率计算样本中含有的其他磺胺类药物的残留量，其操作简便易行。 

经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度：动物组织（鸡肉/猪肉/鱼/虾）样本的最低检测限为1.0μg/kg；鸡蛋样本的最低检测限为4μg/kg；饲料样本的最低检测限为40μg/kg；尿液样本的最低检测限为4μg/kg。动物组织（鸡肉/猪肉/鱼/虾）样本的回收率为95%±15%；鸡蛋样本的回收率为80%±10%；饲料样本的回收率为85%±15%；尿液样本的回收率为90%±10%。