[实用新型]一种检测孔雀石绿的ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及检测孔雀石绿残留量的试剂盒，特别是检测水产品中孔雀石绿残留量的酶联免疫检测（ELISA）试剂盒，ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)是酶联免疫吸附剂测定的简称，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术。 

背景技术

孔雀石绿（Malachite green，MG）分子式为：C₂₃H₂₅N₂Cl，分子量365，电离常数pK值为6.9。pH值为4.0时，全部电离，pH值为6.9时50％电离，pH为7.4时，有25％电离，pH上升为10.1时，则不发生电离。 

自1993年证实孔雀石绿具有抗菌杀虫等药效以来，许多国家曾广泛用作驱虫剂和杀菌剂，以杀灭水产动物体外的寄生虫、原生动物和鱼卵中的霉菌等。在鱼类养殖中使用防治鱼类的水霉病等。在治疗鱼体和鱼卵体表传染病的药物中，很少有其它化学药物可与其效果相媲美，特别是治疗那些由水霉和多子小瓜虫引起的疾病。孔雀石绿的抗菌杀虫机理是：孔雀石绿在细胞分裂时阻碍蛋白肽的形成，使细胞内的氨基酸无法转化为蛋白肽，使细胞分裂受到抑制，从而产生抗菌杀虫作用。 

孔雀石绿等进入人类或动物机体后，通过生物转化可产生致癌、致畸、致突变等副作用。美国食品药品管理局将孔雀石绿作为致癌敏感化合物。孔雀石绿对呼吸系统酶有毒性影响，可导致虹蹲鱼和罗非鱼的呼吸失调。孔雀石绿可在环境中长期存在并对水生和陆生生物产生毒性。临床报道和试验研究都证明孔雀石绿对多器官有毒性。孔雀石绿影响食物的吸收、动物生长和繁殖能力。造成肝、脾、肾和心的病变，皮肤、眼睛、肺部和骨骼的损害。 

鉴于孔雀石绿的危害性，许多国家都将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于所有食品动物。但由于孔雀石绿的抗菌果较好，价格便宜，不少业户在一段时间内仍可能偷偷使用，在国内市场的检查中也屡屡看到孔雀石绿的残留问题，尤其是河南、湖北等地的水产养殖和水产品运输过程中，孔雀石绿仍在被普遍使用。2002年12月农业部对农牧发【1999】17号文《动物性食品中兽药残留限量》进行了重新修订(235号公告)其中规定孔雀石绿为不得检出。 

目前对孔雀石绿的检测方法主要有：薄层色谱法、分光光度法、共振瑞利散射法、气质联用法、高效液相色谱法和酶联免疫法等，目前国内尚无关于孔雀石绿的系统检测方法，该方法的建立为监控动物源性食品中孔雀石绿残留提供了技术支持。 

实用新型内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的孔雀石绿残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中孔雀石绿残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。 

本实用新型的技术方案是：一种检测孔雀石绿的ELISA试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、16瓶试剂，其特征在于：酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔中预包被孔雀石绿偶联抗原制成的检测板，16瓶试剂分别为6瓶孔雀石绿标准品溶液、酶标二抗、抗体工作液、显色液A液、显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、氧化剂浓缩液、孔雀石绿提取剂、样本净化剂。 

检测孔雀石绿的ELISA试剂盒还包括一张盖板膜；放置试剂的下凹瓶位；一个自封袋；盒体为硬纸盒；96孔试剂板为聚苯乙烯酶标板，放于真空铝铂袋内；盖板膜是塑料硬膜；标准品溶液和高浓度标准品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶标二抗用红色帽的白色PE塑料瓶，抗体工作液用绿色帽的白色PE塑料瓶，显色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，显色液B液用红色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用透明帽的半透明PE塑料瓶，浓缩复溶液用蓝色帽的半透明PE塑料瓶，氧化剂浓缩液用黑色帽的棕色PE塑料瓶，孔雀石绿提取剂用蓝色帽的棕色PE塑料瓶，样本净化剂用棕色帽的黑色PE塑料瓶，下凹瓶位共16个，由塑料泡沫制成。 

酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被孔雀石绿偶联抗原；盖板膜大小与酶标板横切面大小一致；标准品溶液6瓶，1mL/瓶；酶标二抗1瓶，0.7mL；抗体工作液1瓶，7mL；显色液A液1瓶，7mL；显色液B液1瓶，7mL；终止液1瓶，7mL；浓缩洗涤液1瓶，40mL；浓缩复溶液1瓶，15mL；氧化剂浓缩液1瓶，1mL ；孔雀石绿提取剂1瓶，10mL；样本净化剂1瓶，20g。