[实用新型]甲基对硫磷ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测甲基对硫磷残留量的试剂盒，特别是检测玉米、苹果中甲基对硫磷残留量的酶联免疫检测（ELISA）试剂盒，ELISA（Enzyme Linked Immunosorbnent Assay）是酶联免疫吸附剂测定的简称，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术。 

背景技术

甲基对硫磷（Parathion methyl，O,O-二甲基-O-对硝基苯基硫代磷酸酯），是一种广谱有机磷杀虫剂、杀螨剂，在世界范围内广泛应用于水稻、棉花、果树、茶叶、蔬菜等经济作物的害虫防治。其作用机制及杀虫谱与对硫磷相似，但该药的药效比对硫磷低，且残效短，对人、畜的毒性也较低，但它仍属高毒农药，且有内吸性，因而限制了它的使用。尽管如此，近年来，因甲基对硫磷中毒的报道仍然屡见不鲜，尤其是在作物和蔬菜上的大量使用，对人体健康造成极大的危害。因此，开发一种简单快速、适用于农药残留现场监控的分析方法具有重要的现实意义。 

目前，甲基对硫磷残留的检测方法主要为仪器法，如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）等，这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国经济作物种植户、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。 

实用新型内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的甲基对硫磷残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中甲基对硫磷残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。 

本实用新型的技术方案是：一种甲基对硫磷ELISA检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告，其特征在于：酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上预包被甲基对硫磷偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别为7瓶标准品溶液、酶标二抗、抗体工作液、显色液A液、显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液，下凹瓶位共15个。 

酶标板为96孔的聚苯乙烯酶标板，由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装的酶标反应微孔条有8个反应孔，放入真空铝箔袋中，盒体为硬纸盒， 下凹瓶位由塑料泡沫制成，以塑料硬膜为盖板膜，盖板膜大小与酶标板横切面大小一致，将14瓶试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶盛装并固定在下凹瓶位中，与酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质控报告一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。14瓶试剂分别为7瓶1ml梯度浓度的标准品溶液、12ml酶标二抗、7ml抗体工作液、7ml显色液A液、7ml显色液B液、7ml终止液、40ml浓缩洗涤液、50ml浓缩复溶液。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定（包括标准分析孔），既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中的残留物（甲基对硫磷）将和酶标板微孔条上预包被的甲基对硫磷偶联抗原竞争抗甲基对硫磷的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与所含残留物（甲基对硫磷）的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中甲基对硫磷的残留量，其操作简便易行。 

经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度：玉米样本的最低检测限为20μg/kg；苹果样本的最低检测限为10μg/kg。玉米样本的回收率为90%±20%；苹果样本的回收率为90%±20%。相对于其他甲基对硫磷检测方法，本试剂盒所需仪器较少，只需要酶标仪、均质器、涡旋仪、离心机和微量加样器等，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。 

本实用新型的有益效果是：能快速、简便、灵敏、准确地用于玉米、苹果中甲基对硫磷残留量的检测。 

附图说明

图1为本实用新型酶标板的侧面纵剖面图（长为8.55cm）； 

图2为本实用新型酶标板的侧面横剖面图（长为12.8cm）； 

图3为本实用新型酶标板的俯视图； 

图4为本实用新型盖板膜平面图； 

图5为本实用新型试剂瓶纵剖面平面图； 

图6为本实用新型固定泡沫模具的俯视图；