[实用新型]一种核糖核苷酸还原酶1基因表达检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测试剂盒，尤其是涉及一种核糖核苷酸还原酶1基因表达检测试剂盒。

背景技术

近年来，随着分子生物学的发展，国内外对细胞癌变的研究已进入到分子水平，人们发现DNA修复和复制的缺陷是细胞发生癌变的重要机制。核糖核苷酸还原酶(RR)在癌组织表达异常增高，同时其催化产物脱氧核糖核苷酸(dNTP)是DNA损伤修复及复制过程中必不可少的原料，因此RR的功能完善与否对肿瘤的发生、发展和防治均有重要影响。

RRM1是RR的一个亚单位，它是DNA合成通路中的限速酶，它能逆转二磷酸核苷酸成为二磷酸脱氧核苷酸属于肿瘤抑制基因，定位于染色体11p15.5区域，含19个外显子。该区域是一个可出现于多种恶性肿瘤的杂合子丢失(loss of heterozygosity，LOH)区域，称为LOH11A。人们很早就发现在胃癌、食管癌和乳腺癌等存在11p15.5的杂合性丢失，因此认为该区域的丢失与恶性肿瘤的转移有关系。另外，也有研究表明，这种杂合性缺失与预后有一定的相关性，具有LOH丢失的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者预后较差，生存期较没有LOH的患者短；但是，也有临床研究的结果显示，高水平表达RRM1的患者其预后较差；这样的结果与之前的RRM1作为抑癌基因高表达时抑制肿瘤侵袭的结论有所不同。通过对比出现不同结果的临床研究所选择的病例发现，早期的NSCLC患者单独接受手术治疗时，高表达RRM1则预后较好，而晚期仅接受含吉西他滨方案化疗的患者RRM1高表达却预后较差，说明RRM1的预测意义因患者的分期和治疗方案的不同有所改变。

众多研究证实DNA修复基因的修复能力与癌症的发病和耐药有关。一般认为，DNA修复基因修复力低者癌症发生的风险较正常人明显增加，而修复力高者则易对化疗药物耐药使化疗失败。RRM1是细胞内在DNA损伤修复能力的代表，因而也是显示病变组织内累积性DNA损伤程度的生物标志。RRM1高表达可相对消弱药物对RRM1的抑制作用，进而导致肿瘤细胞对药物的敏感性降低。

RRM1在所有的肿瘤细胞中都存在表达，而且表达水平差异很大。临床研究已证实RRM1与吉西他滨耐药相关。因此，检测RRM1的表达对于肿瘤患者的治疗和预后有着重要意义。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种核糖核苷酸还原酶1基因表达检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、固定座3、在固定座3上设有容器孔，其容器孔中分别放置去离子水试剂瓶4、扩增引物管5、白蛋白内参引物管6、SYBRpremix Ex Taq(含ROX)管7。

上述各种液体分别装在容器内，插入容器孔内。

所诉容器孔的大小根据去离子水试剂瓶4、扩增引物管5、白蛋白内参引物管6、SYBR premix Ex Taq管7的大小而变化。

所述扩增引物为特异性扩增ERCC1的引物，上游引物序列为5′-CAAGGTCGTGTCCGCAAAG-3′；下游引物序列为5′-GGTGCCTGTTTCCGTCTGA-3′；所述白蛋白内参引物上游引物序列为5′-TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3′，下游引物序列为：5′-CAGCCTGGATAGCAACGTACA-3′。引物包括扩增引物和白蛋白内参引物，引物浓度为10umol/L。

所述SYBR premix Ex Taq(含ROX)(2*Conc.)含有0.4mmol/L的dNTPs，4mmol/L的Mg²⁺，2xBuffer，1U/20μl的Ex Taq HS，1U/20μl Tli RnaseH，1mmol/L SYBR Green 1，0.1mmol/L ROX Reference Dye。

本实用新型与现有产品相比，具有如下积极有益的效果：

本试剂盒结构简单、设计合理、使用方便、制造容易、检测过程不易受污染；本试剂盒在检测一种核糖核苷酸还原酶1基因表达时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。

附图说明

图1为本实用新型的整体结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本实用新型进行进一步说明。

表1为本实用新型PCR反应体系。