[实用新型]鸭性别快速鉴别试剂盒盒体

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，提供一种快速进行鸭的性别鉴定的试剂盒，该试剂盒用于PCR-琼脂糖电泳技术。 

背景技术

家禽的性别由W染色体和Z染色体决定，家禽雌性基因型为ZW型，雄性基因型为ZZ型，Z或W传递给子代的概率是一样的，均为二分之一，其遗传方式遵循孟德尔的独立分配定律和自由组合定律。到目前为止，发现有少数分布在禽类Z和W染色体上的基因，它们不出现在假常染色体区，但都是以W和Z单拷贝出现，且以性染色体两种类型的非重组部分的形式存在。 

最具有典型特征的是CHD1Z--CHD1W（chromodomain helicase DNA binding protein 1）基因，研究认为它们在所有鸟类中(平胸鸟除外)分别与W或Z连锁。由于一些内含子在基因CHDIZ与CHD1W中的序列大小不同，使用保守性引物，就能通过PCR-琼脂糖电泳技术，根据PCR产物的片段大小和数量，判断雄性基因型（ZZ型，一条大的PCR产物片段）和雌性基因型（ZW型，一大一小的两条PCR产物片段）。这两种基因独立进化，使用直接PCR技术分析，为研究鸟类(除平胸鸟之外)分子性别决定提供了途径。随着鸭的胚胎学、发育生物学和分子生物学等学科研究的深入，鸭胚胎早期性别的鉴定成为一个科学问题。经过对现有国内外文献和专利的检索，至今未见有家鸭CHD基因完整序列及分子性别鉴定的研究报道。 

实用新型内容

本实用新型的目的是为了给鸭性别分子鉴定提供一种结构合理、价格低廉的基因分型试剂盒。 

本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的，一种鸭性别快速鉴别试剂盒盒体，所述试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物ZWp、扩增缓冲液、DNA marker和琼脂糖组成。 

其中ZWp详细信息如下： 

引物混合物ZWp表示用于CHD基因PCR扩增的上下游引物混合物，引物信息如下：

上游引物  5'- AGTGCATTGCAGAAGCAATATT - 3'，

下游引物  5'- GCCTCCTGTTTATTATAGAATTCAT - 3'。 

本试剂盒使用方法： 

1、PCR扩增目的片段

1）PCR扩增反应体系准备

在200 μl 的PCR薄壁管中，加入2μl模板DNA（约50 ng ）、12.5μl扩增缓冲液、2μl引物ZWP (5uM)、和8.5μl水，PCR的反应体系为25μl，充分混匀后短暂离心。

2）PCR扩增反应程序设置 

在eppendorf PCR仪上设置PCR的反应条件为：94℃预变性4 min，后94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸6 min，4℃保存备用。程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。

2、鉴定基因型 

反应结束后，取4-10μl反应产物在2％琼脂糖胶，1×TBE电泳液中电泳。室温下，按照电泳槽宽度×6-8V，电泳20分钟。根据电泳图谱，鉴定基因型。

本实用新型由CHD基因PCR扩增的上下游引物混合物ZWp、扩增缓冲液、DNA marker和琼脂糖组成，利用PCR-琼脂糖电泳技术检测基因的基因型，具有准确性高、快速、价格低廉的优点。 

附图说明

图1为本实用新型鸭性别快速鉴别试剂盒的结构示意图； 

图2 CHD基因PCR产物分型图；

图中：1盒体、2衬垫、3特异性引物混合物ZWp、4扩增缓冲液、5DNA marker、6琼脂糖。

具体实施方式

结合实施例和附图作进一步说明本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。 

一种鸭性别快速鉴别试剂盒，由盒体1，盒体内的衬垫2，衬垫的各孔腔内分别置入的特异性引物混合物ZWp3，扩增缓冲液4， DNA marker5和琼脂糖6组成。 

运用本试剂盒对已知性别的30只13胚龄鸭胚和40只高邮鸭进行分子性别分型鉴定。 

1、样品 

采集30只13胚龄鸭胚的尿囊膜和40只高邮鸭的血液，应用传统的苯酚/氯仿法提取DNA，并将DNA浓度稀释到50ng/μl。

2、PCR扩增反应及结果 

1）PCR扩增反应体系准备