[实用新型]丁胺卡那霉素ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测丁胺卡那霉素的酶联免疫试剂盒。 

背景技术

氨基糖苷类抗生素(AGs)是由氨基糖与氨基环醇形成的苷，AGs的结构和理化性质相似。由于结构中含有多个氨基和羟基，故呈碱性，极性和水溶性较高。AGs的抗菌作用强，属常用的抗生素。常用的氨基糖苷类药物含有1个l，3或1，4二氨基环多醇和l或2个氨基糖。根据氨基环多醇的结构，可将AGs划分为两大类：链霉胺类和2-脱氧链霉胺类。按其来源，AGs又可分为：由链霉菌产生的抗生素，包括链霉素族、卡那霉素族和新霉素族；有小单孢菌产生的抗生素，主要包括庆大霉素族。 

丁胺卡那霉素(Amikin)又名阿米卡星，是卡那青霉素a的半合成衍生物的硫酸盐。临床主要用于对庆大霉素、卡那霉素耐药的革兰阴性杆菌如大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌引起的各种感染。长期或反复大量摄入丁胺卡那霉素可导致前庭神经和听神经损害，肾脏出现轻度损害，严重者可出现肾功能衰竭。卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，被广泛用于治疗猪、牛、鸡等由金黄色葡萄球菌及结核杆菌所致的各种感染。为保证我国出口禽肉的卫生质量和食用安全，促进禽肉出口，国家质量监督检验检疫局2002年第37号文件中规定了禁用药物和允许使用药物。其中，丁胺卡那霉素最大残留限量为：肌肉100μg/kg；肝300μg/kg。日本肯定列表制度将其列为使用一律标准物质，即最大残留为10μg/kg。目前对氨基糖苷类抗生素残留的检测方法主要有高效液相法、微生物法、免疫分析法，此外还有一些其他方法用于氨基糖苷类药物的分析，例如电化学法、薄层色谱法、质谱法等。采用微生物法，不适于快速检测。色谱法需要复杂昂贵的仪器，且样品前处理过程繁琐，不适应现场大量样本的筛查。 

实用新型内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的丁胺卡那霉素残留检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中丁胺卡那霉素残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。 

本实用新型的技术方案是：一种丁胺卡那霉素ELISA检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告，其特征在于：酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上 预包被丁胺卡那霉素偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别6瓶标准品溶液、1瓶高浓度标准品溶液、酶标二抗、抗体工作液、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液，下凹瓶位共15个。 

盒体是硬纸盒； 96孔的聚苯乙烯酶标板，放于真空铝箔袋内；盖板膜是塑料硬膜；标准品溶液和高浓度标准品溶液均用黑色帽的棕色玻璃瓶，酶标二抗用红色帽的白色PE塑料瓶，抗体工作液用绿色帽的白色PE塑料瓶，底物液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，底物液B液用红色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用透明帽的半透明PE塑料瓶，浓缩复溶液用蓝色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位由塑料泡沫制成。 

酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被丁胺卡那霉素偶联抗原；盖板膜大小与酶标板横切面大小一致；标准品溶液6瓶，1ml/瓶，浓度分别为0μg/L，1μg/L，3μg/L，9μg/L，27μg/L ，81μg/L；高浓度标准品溶液1瓶，1ml；酶标二抗1瓶，7ml；抗体工作液1瓶，7ml；底物液A液1瓶，7ml；底物液B液1瓶，7ml；终止液1瓶，7ml；浓缩洗涤液1瓶，40ml；浓缩复溶液1瓶，50ml。 

每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定（包括标准分析孔），既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中的丁胺卡那霉素将和酶标板微孔条上预包被的丁胺卡那霉素偶联抗原竞争抗丁胺卡那霉素抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与样本中所含丁胺卡那霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中丁胺卡那霉素含量，其操作简便易行。 

经实验表明本试剂盒检测鸡蛋中丁胺卡那霉素残留，具有很高的灵敏度，样本的最低检测限为5μg/kg，回收率为90%±15%。相对于采用仪器方法检测丁胺卡那霉素，本试剂盒所需仪器较少，只需要酶标仪、涡旋仪、离心机、匀浆机和微量加样器等，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。 

本实用新型的有益效果是：能快速、简便、灵敏、准确地用于丁胺卡那霉素残留量的检测。