[实用新型]维生素B12 ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测维生素B12的酶联免疫试剂盒。 

背景技术

维生素是各种生物维持正常生理功能所必需的一类低分子有机化合物，它们大多数是生化代谢过程中的主要辅酶，在体内参与、调节、控制许多合成和分解代谢，当生物体缺乏维生素时，就会引发物质代谢障碍，引起多种疾病。维生素B12又叫钴胺素，其主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。维生素B12对于促进畜禽生长特别是在促进幼畜生长发育方面效果显著，在畜禽体内主要以参与一碳单位和丙酸代谢发挥作用，影响遗传物质的合成，还能维持神经功能的完整性，是畜禽不可缺少的营养原料。养殖生产过程中，常规饲料中的维生素B12一般作为安全用量，额外添加适量维生素B12可以提高畜禽生产性能，带来可观的经济效益。 

近年来，余林梁等报道了以HPLC测定维生素H，邓富良等用HPLC同时测定注射用水溶性维生素中维生素H和叶酸，任一平、龙朝阳等以HPLC测定食品中的叶酸，杨谊等以HPLC测定维生素B12。隋玉荣等用离子对色谱法测定了维生素B12及叶酸的含量，H. B.Li、Heudi用不同波长同时测定了维生素H、叶酸和维生素B12，宋金春等通过优化色谱条件，建立了同一波长条件下HPLC同时测定注射用水溶性维生素中维生素H、叶酸及维生素B12含量的方法。另外维生素B12的测定方法主要有比色法、电化学分析法、离子交换法、激光共振拉曼光谱法等，这些方法均是先测定样品中 Co 含量，由钴含量换算成VB12的含量，操作繁琐，选择性较差。刘保生等建立了利用AO-R6G 能量转移荧光猝灭法测定维生素B12的新方法。免疫学检测方法也应用于维生素B12的检测中，采用间接竞争ELISA方法测定维生素B12含量的方法，简便、快速、灵敏度高，稳定性好，能满足维生素B12的现场大批量样品的快速筛选。 

实用新型内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的维生素B12检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中维生素B12的测定，减少了检测样本所需要的时间。 

本实用新型的技术方案是：一种检测维生素B12的酶联免疫试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、13瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋，其特征在于：采用96孔聚苯乙烯酶标板作为固相载体，酶标板由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，在试剂盒酶标板微孔条 上预包被维生素B12偶联抗原制成检测板，放入真空铝箔袋中，盒体为硬纸盒，以塑料硬膜为盖板膜，将5瓶1ml梯度浓度的标准品溶液、1ml高浓度标准品溶液、12ml酶标二抗、7ml维生素B12抗体工作液、7ml底物液A液、7ml底物液B液、7ml终止液、40ml浓缩洗涤液、50ml复溶液试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶和玻璃瓶盛装并固定在泡沫塑料模具中与酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质检报告一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定（包括标准分析孔），既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中的维生素B12将和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗维生素B12的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与样本中所含维生素B12的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中维生素B12含量，其操作简便易行。 

经实验表明本试剂盒检测谷物类（玉米面、黄豆面、小米面、大米面）、牛奶、奶粉中维生素B12，具有很高的灵敏度，样本的最低检测限为谷物4μg/kg，回收率为85%±15%；奶粉4μg/kg，回收率为80%±10%；原奶1μg/L，回收率为85%±15%；成品奶2μg/L，回收率为90%±10%。本试剂盒所需仪器较少，只需要酶标仪、振荡器、涡旋仪、离心机、匀浆机和微量加样器等，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。 

本实用新型的有益效果是：能快速、简便、灵敏、准确地用于维生素B12的检测。 

附图说明

图1为本实用新型酶标板的侧面纵剖面图（长为8.55cm）； 

图2为本实用新型酶标板的侧面横剖面图（长为12.8cm）； 

图3为本实用新型酶标板的俯视图； 

图4为本实用新型盖板膜平面图； 

图5为本实用新型试剂瓶纵剖面平面图；