[实用新型]胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条

说明书

技术领域

本实用新型属于临床医学检验领域，具体涉及一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条。

背景技术

胱抑素C(Cystatin C)是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员，是一种非糖基化的碱性蛋白，相对分子质量为13.395Da，等电点为8.0-9.5，由122个氨基酸组成。胱抑素C基因无组织学特异性，广泛地存在各种体液中，如脑脊液、血液、唾液、精液等，机体胱抑素C产生率相当恒定。而胱抑素C是一种低分子量蛋白质，可经肾小球自由过滤，肾脏是清除循环中胱抑素C的唯一器官，所以血清胱抑素C浓度主要由肾小球过滤率（glomerular filtration rate,GFR）决定，由此可见胱抑素C是一种理想的反映GFR变化的内源性标志物。

胱抑素C在临床上被视为监测肾功能的一项高灵敏度、高特异性的指标。血清胱抑素C被认为是比肌酐、尿素氮等更理想、更灵敏的测定肾小球过滤率内源性指标；尿胱抑素C水平可以反映肾小球功能；另外胱抑素C在肾衰竭、肾移植、糖尿病肾病、高血压肾病等继发性肾病的早期检测机预后监测也有应用。

胱抑素C最早采用单向免疫扩散法（RID）及酶免疫测定法（EIA）对胱抑素C含量进行测定，但这两种方法不仅费时，而且灵敏度也较差。较简单且更灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定（RIA、FIA及EIA）的方法能改善胱抑素C的可靠性，但测定时间较长，无法常规应用，更无法用于急诊测定。均相溶胶颗粒型免疫测定方法虽然有利于生化仪清洗，但是操作繁琐如需要两种试剂反应，测定时间较长，灵敏度不高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便、灵敏度高、能够快速检测的胱抑素C胶体金检测试纸条。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条，包括样品垫、与所述样品垫一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的结合垫、与所述结合垫另一端紧密相连的硝酸纤维素膜、以及与所述硝酸纤维素膜的另一端紧密相连的吸水纸，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸均设置于底衬上，所述胶体金颗粒标记物为微信号放大系统，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素抗人胱抑素C抗体复合物，所述硝酸纤维素膜上包被有另一抗人胱抑素C抗体的检测线和包被有羊抗兔IgG的控制线。

所述胶体金颗粒粒径大小为35-60nm。

所述胶体金颗粒-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物用量为6-10μg/cm²。

所述胶体金颗粒标记抗人胱抑素C抗体与硝酸纤维素膜上包被的另一抗人胱抑素C抗体为配对的单抗或配对单抗-多抗。

所述结合垫材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。

一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法包括如下步骤：

⑴ 制备微信号放大系统

a. 将待标记亲和素预先在0.01mol/L pH7.0的NaCl溶液中4℃透析过夜，然后4℃高速离心30min，以0.1mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液的pH至7.5-8.5，标记亲和素，形成胶体金标记亲和素；

b. 按常规方法制备生物素化抗人胱抑素C抗体；

c. 将步骤a得到的胶体金标记亲和素与步骤b得到生物素化抗人胱抑素C抗体连接，得到胶体金-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物，经过洗涤处理后，即得微信号放大系统；

⑵ 将步骤⑴的胶体金-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物按用量为6-10μg/cm²喷涂在结合垫上，干燥12小时以上，备用；

⑶ 用包被缓冲液稀释另一种抗人胱抑素C抗体和羊抗兔IgG，将稀释后的两种抗体细致均匀地喷于硝酸纤维素膜上，两种抗体渗入硝酸纤维素膜后分别形成检测线和控制线；

⑷ 在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸得到试纸板，按照要求切割成适当宽度的试纸条。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

⑴ 本发明在现有检测试纸条的基础上，采用了生物素-亲和素微信号放大系统，在检测样品中胱抑素C过程中，扩大了胱抑素C的信号，增加检测灵敏度，避免因信号太弱而出现假阴或漏检；

⑵ 本发明的试纸条具有操作简便（一步操作即可完成）和快速（检测时间5-8min）等优点；

⑶ 本发明的试纸条还可以与配套仪器结合实现定量检测。

附图说明