[实用新型]用实时荧光定量PCR检测NAT2基因多态性的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种用于检测基因多态性的试剂盒。

背景技术

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病。近10余年来，由于艾滋病的流行、移民和流动人口的增加、多种耐药结核菌的增多，以及不少国家和地区对结核病控制的忽视等因素，全球结核病形势急剧恶化，无论发达国家或发展中国家，结核病病人数都在增加。在世界卫生组织推荐的标准抗结核化疗方案中,异烟肼、利福平、吡嗪酰胺是不可替代的一线抗结核药，这些药物对肝脏有一定毒性。药物性肝损害是抗结核药物最常见的毒副作用之一，也是结核患者停止化疗的最常见原因之一。抗结核药物性肝损害尤其是异烟肼所致肝损害已屡见不鲜，重症肝炎的亦不少见，甚至产生致命后果。对于出现药物性肝损害的结核患者是选择继续治疗还是停用抗结核药是个两难选择。

异烟肼在肝内通过N-乙酰化酶代谢为乙酰化异烟肼及毒性较强的乙酰肼和异烟酸，导致肝细胞变性和坏死；代谢过程中生成低分子自由基，也可诱导脂质过氧化反应，引起药物性肝炎。大量研究表明慢乙酰化型患者使用异烟肼时更容易出现较重肝损害。因此检测NAT2基因，对其进行分型不仅可以预测结核患者发生肝损害的风险，同时可以为个体化药物治疗提供指导。

目前检测基因多态性的方法很多，最常用的PCR-RFLP法，另外还有反向点杂交法、等位基因特异性聚合酶链反应、直接测序法等。后者是所有方法的金标准，但由于其费用昂贵，未广泛使用。而PCR-RFLP法虽然费用较低，操作简单，但特异性和敏感性都不太理想，且检测时间较长。

实用新型内容

本实用新型提供一种能够有效减少时间和成本的用于检测NAT2基因多态性的试剂盒。

本实用新型提供一种用实时荧光定量PCR检测NAT2基因多态性的试剂盒，包括盒体、衬垫、装有PCR反应液的第一容器及装有检测NAT2基因碱基突变的探针的至少一个第二容器，所述衬垫具有多个容器孔，所述第一容器置于与其对应的所述容器孔，所述第二容器置于与其对应的所述容器孔，所述第二容器包括装有检测NAT2基因的第341位碱基突变的341探针的第二容器、装有检测NAT2基因的第481位碱基突变的481探针的第二容器、装有检测NAT2基因的第590位碱基突变的590探针的第二容器和装有检测NAT2基因的第857位碱基突变的857探针的第二容器中的一个或多个。

进一步的，所述第二容器包括装有检测NAT2基因的第341位碱基突变的341探针的第二容器、装有检测NAT2基因的第481位碱基突变的481探针的第二容器、装有检测NAT2基因的第590位碱基突变的590探针的第二容器和装有检测NAT2基因的第857位碱基突变的857探针的第二容器中的多个。

进一步的，所述第二容器包括装有检测NAT2基因的第341位碱基突变的341探针的第二容器及装有检测NAT2基因的第857位碱基突变的857探针的第二容器中的多个。

进一步的，所述第二容器包括装有检测NAT2基因的第481位碱基突变的481探针的第二容器及装有检测NAT2基因的第590位碱基突变的590探针的第二容器。

所述341、481、590、857探针均包括上游引物、下游引物、野生型探针及突变型探针。

所述探针组由341、481、590和857探针中的多个组成。

所述探针组由341探针和857探针组成。

所述探针组由481探针和590探针组成。

检测时，用实时荧光定量PCR法检测NAT2基因的试剂盒，其含有上述本实用新型的NAT2基因检测用探针组。

检测时，用实时荧光定量PCR法检测NAT2基因的多态性方法，包含下述（a）工序：以试样中的DNA为模板，使用本实用新型的NAT2基因检测用探针对，在反应液中检测上述NAT2基因的工序。

一种多态性解析方法，其为解析NAT2中4个检测突变位点的多态性方法，包括下述(A)～(D)工序：

（A）利用本实用新型的基因检测的制造方法，在反应液中检测NAT2基因中的含有检测对象位点的区域的工序；

（B）准备含有上述（Ⅰ）工序的试样模板和能够与上述检测对象位点杂交的探针的反应液的工序；

（C）改变上述反应液中各成分的浓度、退火温度，检测上述试样模板的扩增曲线荧光信号的工序；

(D)随扩增循环增多，荧光强度不断累积，确定上述检测对象位点多态性的工序。