[实用新型]检测Y染色体微缺失的实时荧光定量PCR试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测Y染色体微缺失的试剂盒。

背景技术

据统计，全世界有15％的夫妇患有不育（孕）症，其中50％以上由男方所致。近年来研究表明30％以上的男性不育是由于遗传因素引起的生精障碍，通常表现为男性Y染色体长臂（q臂）11区上无精因子基因家族（Azoospermiafactor，AZF）多个位点的缺失突变，其中任何一个座位的微缺失都可导致生精障碍，而对于因Y染色体微缺失引起的男性不育是无法治疗的。在胞质内单精子注射（ICSI）技术辅助生育治疗前检测Y染色体微缺失可以为临床治疗提供指导，减少不必要的经济浪费。目前欧洲、美国及我国相关学会已经建议将检测Y染色体微缺失列为男性不育的筛查项目。

目前检测基因微缺失的方法很多，最常用的PCR-RFLP法，另外还有反向点杂交法、等位基因特异性聚合酶链反应、直接测序法等。后者是所有方法的金标准，但由于其费用昂贵，未广泛使用。而PCR-RFLP法虽然费用较低，操作简单，但特异性和敏感性都不太理想，其检测通量小，对于样本量较大的临床检测不适用。

实用新型内容

本实用新型提供一种能够有效减少时间和成本的用于检测Y染色体微缺失的试剂盒。

本实用新型提供一种用于检测Y染色体微缺失的实时荧光PCR试剂盒，包括盒体、衬垫、装有PCR反应液的第一容器及装有引物探针组合的至少一个第二容器，所述衬垫具有多个容器孔，所述第一容器置于与其对应的所述容器孔，所述第二容器置于与其对应的所述容器孔，所述第二容器包括装有检测SY84位点的SY84引物探针组合的第二容器、装有检测SY86位点的SY86引物探针组合的第二容器、装有检测SY127位点的SY127引物探针组合的第二容器、装有检测SY134位点的SY134引物探针组合的第二容器、装有检测SY254位点的SY254引物探针组合的第二容器及装有检测SY255位点的SY255引物探针组合的第二容器中的一个或多个。

所述检测Y染色体微缺失的实时荧光PCR试剂盒，还包括装有检测男性性别决定基因SRY的SRY引物探针组合的第三容器，所述第三容器置于与其对应的所述容器孔。

所述第二容器包括装有检测SY84位点的SY84引物探针组合的第二容器、装有检测SY86位点的SY86引物探针组合的第二容器、装有检测SY127位点的SY127引物探针组合的第二容器、装有检测SY134位点的SY134引物探针组合的第二容器、装有检测SY254位点的SY254引物探针组合的第二容器及装有检测SY255位点的SY255引物探针组合的第二容器中的多个。。

所述第二容器包括装有检测SY84位点的SY84引物探针组合的第二容器、装有检测SY86位点的SY86引物探针组合的第二容器、装有检测SY127位点的SY127引物探针组合的第二容器、装有检测SY134位点的SY134引物探针组合的第二容器、装有检测SY254位点的SY254引物探针组合的第二容器及装有检测SY255位点的SY255引物探针组合的第二容器。

所述检测Y染色体微缺失的实时荧光PCR试剂盒，还包括装有阳性对照品的第四容器和装有阴性对照品的第五容器，所述第四容器和第五容器分别置于与其对应的所述容器孔。

所述SY84、SY86、SY127、SY134、SY254及SY255引物探针组合均包括上游引物、下游引物及Taqman荧光探针。

不同的引物探针组合用于检测Y染色体AZF区域的不同位点，可以根据需要选择检测其中的一个或多个位点，对应的，选择与该位点对应的引物探针组合。

Y染色体的AZF区域由AZFa区域、AZFb区域和AZFc区域组成。

所述试剂盒还包括用于检测男性性别决定基因SRY的SRY引物探针组合，所述SRY引物探针组合包括上游引物、下游引物及Taqman荧光探针。

SRY引物探针组合用于质控，其可以根据检测要求选择采用或不采用。

所述引物探针组合由SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、和SY255引物探针组合组成，所述引物之间Tm值相差波动于2-4℃，所述探针之间Tm值相差波动于2-4℃，引物探针之间Tm值相差为10℃左右。

引物包括针对各位点的引物和针对基因SRY的引物。探针包括针对各位点的探针和针对基因SRY的探针。

所述PCR反应液还包括含MgCl、KCl、Tris的10倍缓冲液(10*Buffer)、含dATP、dCTP、dGTP、dUTP的dNTP及rTaq酶。