[实用新型]玉米赤霉醇检测试剂盒

说明书

（一）技术领域：本实用新型涉及一种玉米赤霉醇检测试剂盒，特别是检测动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的试剂盒。

（二）背景技术：玉米赤霉醇是自然环境中的镰刀菌产生的玉米赤霉烯酮的还原产物，属于雌性激素，具有维持副性征和代蛋白同化效应，除一般治疗用途外，还被广泛用于促进生长。其促生长效果对反刍动物最为显著，可增重10%~40%，因此在养牛业中被大量应用。由于雌激素类物质具有明显的致癌效应，已被大部分国家禁止用于促生长目的，不得在食品中检出。

目前，常用于玉米赤霉醇残留检测的方法主要有仪器分析法。仪器分析法主要有高效液相色谱分析法（HPLC）、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)，这些方法的前处理过程繁琐、检测费用较高，不宜用于大量样本筛查，推广使用受到限制。

（三）实用新型内容：本实用新型提供一种小巧轻便的玉米赤霉醇检测试剂盒，其操作简便，检测灵敏度高，成本低，可进行一次连续进行多个样品中玉米赤霉醇残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。

玉米赤霉醇检测试剂盒，包括固相载体、放试剂的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，固相载体上设有微孔条，微孔条包括微孔、包被层；试剂瓶包括装有玉米赤霉醇单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。

所述包被层由玉米赤霉醇偶联抗原组成。

所述试剂盒还包括6瓶装有玉米赤霉醇标准液的试剂瓶，2瓶装有底物显色液的试剂瓶，1瓶装有终止液的试剂瓶，1瓶装有洗涤液的试剂瓶，1瓶装有缓冲液的试剂瓶。

所述固相载体由96孔聚苯乙烯试剂板组成。

每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定，既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。检测时，样本中的玉米赤霉醇将和微孔条包被层的玉米赤霉醇偶联抗原竞争玉米赤霉醇单克隆抗体，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体后，用底物显色液显色，样本吸光度值与样本中玉米赤霉醇的残留量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中玉米赤霉醇残留量。

经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度：检测灵敏度为：0.05μg/L。相对于其他玉米赤霉醇检测方法，本试剂盒所需仪器较少，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。

本实用新型的有益效果是：能快速、简便、灵敏、准确地用于动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测。

（四）附图说明：

图1本实用新型试剂盒的固相载体一列微孔条图。

图2 本实用新型固相载体图。

图3 本实用新型盒体、下凹瓶位结构示意图；

（五）具体实施方式：

如图1至图3所示，玉米赤霉醇检测试剂盒，盒体1内具有固定模具形成的下凹瓶位2，下凹瓶位用于放置装有溶液的试剂瓶，96孔聚苯乙烯试剂板组成的固相载体3，固相载体的的微孔条4包括微孔5和包被层6，包被层由玉米赤霉醇偶联抗原组成，试剂瓶包括装有玉米赤霉醇单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。

为了更有利于检测玉米赤霉醇残留的检测，试剂盒还可以包括有6瓶装有玉米赤霉醇标准液的试剂瓶，2瓶装有底物显色液的试剂瓶，1瓶装有终止液的试剂瓶，1瓶装有洗涤液的试剂瓶，1瓶装有缓冲液的试剂瓶。

试剂盒的试剂瓶内的具体成分如下：

（1）玉米赤霉醇单克隆抗体工作液7ml /瓶；

（2）玉米赤霉醇标准品溶液1ml/瓶，浓度分别为0μg/L、0.05μg/L、0.1μg/L、0.2μg/L、0.4μg/L、0.8μg/L；

（3）辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体工作液12ml/瓶；

（4）底物显色液，分别为底物显色A液，底物显色B液，底物显色液A液为过氧化脲7ml/瓶，底物显色液B液为四甲基联苯胺7ml/瓶；

（5）终止液7ml/瓶；

（6）缓冲液50ml/瓶，为含有3%卵清蛋白、pH值为7.0、0.1-0.3mol/L磷酸盐缓冲液。使用时2倍稀释。

（7）洗涤液40ml/瓶，为含有0.6-1.2%吐温-80、0.3%硫柳汞防腐剂、pH值为7.2，0.1mol/L磷酸盐缓冲液。使用时20倍稀释。

试剂盒中用到的主要材料的制备方法：

玉米赤霉醇偶联抗原的制备

（1）玉米赤霉醇偶联抗原的制备

将玉米赤霉醇与血蓝蛋白通过混合酸酐法偶联得到玉米赤霉醇偶联抗原。

玉米赤霉醇单克隆抗体的制备

（1）动物免疫