[实用新型]一种快速检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板，具体涉及一种检测玉米赤霉烯酮的免疫胶体金快速检测试剂板。

背景技术

玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)又称F-2毒素，首先从有赤霉病的玉米中分离得到。其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏，如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，110℃下处理1h才被完全破坏。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物，其中玉米的阳性检出率为45％，最高含毒量可达到2909mg/kg；小麦的检出率为20％，含毒量为0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系统，可使家畜、家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症。妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸胎。食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心、发冷、头痛、神智抑郁和共济失调等。

玉米赤霉烯酮的危害已引起很多国家的重视，部分国家已制定了谷物中玉米赤霉烯酮的限量标准。如澳大利亚规定牛饲料中玉米赤霉烯酮的允许量≤150μg/kg；俄罗斯规定谷物、植物油、坚果中的允许量≤1000μg/kg；法国规定谷物、植物油中的允许量≤200μg/kg；巴西规定玉米中的允许量≤200μg/kg；我国GB13078.2-2006“饲料卫生标准饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量”规定配合饲料、玉米中的允许量≤500μg/kg。

目前，一般采取薄层层析法、液相和气相色谱法、酶联免疫法等方法对玉米赤霉烯酮进行测定。薄层层析法方法简单，但其灵敏度较低；而液相和气相色谱等检测方法的灵敏度虽然很高，但方法较为复杂，对仪器的要求也很高。另外，也可从分子生物学的角度进行分析，测定的范围在5～100μg/mL。上述方法各有其优点，但是对于户外、现场检测仍然不能满足，因此需要借助于免疫胶体金层析技术。

胶体金免疫层析法是在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，除了具备酶联免疫法的诸多优点外，还克服了酶联免疫法的一些不足。该方法将反应所需要的原料的全部或大部分均已整合到试剂中，反应通常只需数分钟至数十分钟，检测结果以肉眼可见的显色条带来判读。此法具有简便快速、操作简单、特异性强、不需要额外设备等优点，现已被广泛应用于生物技术的诸多领域。

实用新型内容

本实用新型针对饲料中的玉米赤霉烯酮残留开展研究，提供一种用于现场快速筛选玉米赤霉烯酮阳性饲料样本的免疫胶体金快速检测试剂板。本实用新型具有简单、快速、灵敏度高等特点，无须仪器设备配合测定。检测过程不受地点限制，既可在实验室中进行，也可进行现场测定，15min左右即可完成对样品中玉米赤霉烯酮的定性和半定量测定。

本试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。在样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻的地方有1～2mm的重叠，一方面是为了保证层析作用从样品垫到吸水垫部位的顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。

胶体金结合垫上包被有抗ZEN单抗与胶体金的偶联物；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有ZEN-OVA偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和质控线。

本实用新型试剂板应用层析式抗体免疫竞争原理，通过抗原和金标抗体反应显色，特异性检测饲料中的玉米赤霉烯酮残留。如果样品溶液含有残留，玉米赤霉烯酮先和胶体金颗粒上的抗体反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测线时，胶体金颗粒上抗体的活性位点因被样品溶液中的玉米赤霉烯酮占据而无法与检测线上玉米赤霉烯酮特异性抗原结合；当样品中的玉米赤霉烯酮含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线显色较质控线浅甚至无显色，则判定为阳性。相反，如果样品中玉米赤霉烯酮含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色与质控线相近或偏深，则判定为阴性。

本实用新型试剂板的各部分组成成分与功能如下：

塑料模板，起固定试纸条及标示功能区(加样孔、检测区、质控区)的作用。

背衬为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样品垫由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液与缓冲样品溶液pH值的作用。