[发明专利]从液体中捕获可粘接目标的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从包含可粘接目标的液体中捕获所述可粘接目标的方法以及涉及所述可粘接目标的化验处理过程。

背景技术

尽管本发明具有广阔和普通的适用性，但是它与监测食品和水中的微生物的问题特别相关，并将特别参考上下文来介绍。

用于化验在水和食品中的有机体含量（例如隐孢子虫和沙门氏菌）的普通方法将耗费时间和劳动强度大。

在这些化验处理过程中的主要问题是有机体可能在大体积的液体中存在非常少的数量，且必须首先集中在一定体积中，它们可在该体积中进行检测。

通常，通过使得大体积的水经过纤维素过滤材料来浓缩水试样，该纤维素过滤材料再破碎和置于较小体积的液体中，在该液体中，它搅拌较长时间，以便从过滤材料中释放捕获的有机体。存在于液体试样中且这样被捕获以及成功从过滤材料中释放的有机体的比例相对较差，且操作时间长，通常花费大约24个小时来进行。这种处理过程的产品是有机体仍然非常稀少的试样。

用于检测有机体在食品中的存在的传统方法需要富集/培养的时期，该富集/培养时期将能够允许这些有机体生长。存在于富集试样中的有机体的增加数量将帮助检测和鉴定。不过，需要富集时期意味着操作处理过程通常延长大约2天，并使得定量困难。

近来，WO-A-95/31726提供了一种用于使用可磁吸引颗粒来从液体中捕获可粘接目标的方法，该可磁吸引颗粒对于所述可粘接目标具有亲和力。该方法包括通过磁力来将所述颗粒吸引至固体支承件上，并使得大体积的液体通过固体支承件或在固体支承件上冲洗，该固体支承件有磁吸引的颗粒。再对于捕获的可粘接目标化验该颗粒。已经发现该方法捕获存在于液体中较大比例的可粘接目标。这些能够释放至较小体积的液体中，以便浓缩它们。

发明内容

本发明提供了一种从包含可粘接目标的液体中捕获所述可粘接目标的方法，包括：使得所述液体与可磁吸引的颗粒接触，该颗粒对于所述可粘接目标具有亲和力；以及使得所述颗粒通过磁吸引力而重复地运动通过所述液体到至少一个固体支承件区域，以便将所述可粘接目标捕获在所述颗粒上。

在这里，可粘接目标用于包括：微生物，例如细菌、原生生物和病毒；分子目标，例如抗体和其它蛋白质、肽、核酸、化学药剂和离子；以及细胞目标，包括真菌细胞、植物细胞、动物细胞（包括人体细胞）、昆虫细胞和干细胞。

因为颗粒重复地运动至至少一个固体支承件区域，因此颗粒能够追踪通过包含可粘接目标的大体积液体，该可粘接目标将在它们暴露于液体中时被捕获。因此，即使当可粘接目标以较低浓度存在于液体中时，颗粒也可以足够量地遇到和捕获所述可粘接目标用于进行进一步操作。

而且，当颗粒保持在固体支承件区域上，同时用还未处理的液体试样来代替这样处理液体试样时，可以通过相同磁颗粒来处理多份液体。这使得在该操作过程中包含可粘接目标的液体体积能够比由颗粒占据的液体体积大得多。

优选是在颗粒被化验之前从最终的所述固体支承件区域释放具有捕获的可粘接目标的磁颗粒。这优选是通过降低磁吸引力来实现，但是也可以通过在保持磁吸引力的同时进行强力冲洗或者甚至吹气而实现。

当颗粒从固体支承件释放时，它们可以收集在大大减小的液体体积中。因此可以实现非常大的浓缩要捕获的可粘接目标。

也可选择，颗粒可以在保持于最终固体支承件区域上的同时对于捕获的可粘接目标进行化验。

可磁吸引的颗粒可以是铁磁性、顺磁性或者超顺磁性的颗粒。

目前已知和在商业上很容易获得多种形式的可磁吸引颗粒。示例包括在US-A-4554088和US-A-3917538中所述的氧化铁颗粒、如在Biotec.和Bioengr.XIX：101-124（1977）中所述的氧化镍颗粒、如在US-A-4732811中所述的包含磁颗粒的琼脂糖-聚醛小球、DYNAL小球（商业上可获得的、磁性聚苯乙烯涂覆的小球）、Magogel44（磁性聚丙烯酰胺-琼脂糖小球）、如在Clin.Chim.Acta.69:387-396（1976）中所述的ENZACRY（聚M苯二胺/氧化铁）。包含氧化铁颗粒的纤维素在Clin.Chem.26:1281-1284（1980）中介绍，且白蛋白磁微球在J.IMMUNOL.Methods53:109-122（1982）中介绍。磁多孔玻璃颗粒在WO-A-93/10162中介绍。

优选是，颗粒为顺磁性或超顺磁性材料，因为这些颗粒不会由于获得永久性的感应磁场而聚集在一起。