[发明专利]用于固定配体的新型粘合表面

说明书

技术领域

本发明涉及包含固定在涂布于载体表面之一（enduit sur l’une des faces du support）的粘合剂上的至少一种配体的新型复合物(complexe)。

背景技术

使用固定在载体上的配体是常见的，尤其在诊断试验领域和在生物工艺学领域。这些系统允许使用大量的分子，如在用于DNA或RNA分析的芯片的情况下。

已经广泛描述了配体在载体上的固定（Sambrook等人，1989）。该固定方法被证实是困难、昂贵、漫长和部分有效的。它们基于吸附、离子或共价键合、或在凝胶或聚合物类型的基质中捕集配体。

已经开发了方法，由此专利申请WO 2005/114417描述了使用施加到粘性载体上的球状蛋白层，随后向球状蛋白的层上施加交联剂，该蛋白质催化剂通过与交联剂的反应固定在该表面上。

文献WO 03/072  752描述了能够以干燥形式、高点密度固定蛋白质并具有高信噪比的在带有聚偏二氟乙烯（PVDF）的疏水性和聚合层的刚性基底上制得的蛋白质芯片。

发明内容

本发明能够通过使用包含具有至少两个表面且其中一个表面具有粘合剂和固定在所述粘合表面上的至少一种配体的涂层的复合物克服了上述缺陷。

在本发明的上下文中，沉积在该粘合表面上的配体可以具有蛋白质性质：蛋白质、寡肽、多肽、抗体，具有核酸性质：DNA、RNA、寡核苷酸（即引物），其还有可能是糖（寡糖或多糖）或小分子，其任选是合成的，如毒素、杀虫剂、激素、除草剂、杀真菌剂或神经递质。

由此，当配体为蛋白质类型时，无需对粘合表面进行预处理。

所用载体可以由玻璃或塑料板、聚酯膜或可以用粘合剂涂布的任何其它材料组成。

在本发明的特定实施方案中，该载体在其两个表面上都具有粘合剂涂层（图1）。

粘合剂是普通粘性聚合物，其可以具有活化表面。可以提及的实例包括非反应性粘合剂，如苯乙烯-丁二烯共聚物、丁腈橡胶、聚(乙酸乙烯酯)及其聚合物、聚乙烯醇缩乙醛，压敏粘合剂如聚丙烯酸酯、硅橡胶、聚(乙烯醚)，或者反应性粘合剂如双组分聚氨酯粘合剂、环氧粘合剂、厌氧性丙烯酸类或氰基丙烯酸酯。

例如，已经使用下列材料：

-3M 7966WDL（粘合剂3M^TM 200MP）

-5 Stars Double Sided Display Tape Polypropylene，

3M^TMOptically Clear Overlaminating Film 76991，

Ultra Clear Removable Overlaminating Film 76991。

选择该配体以使得与规定的抗配体(antiligand)特异性相互作用。取决于基底的性质和固定方式（通过亲合力、共价等等）。可以将该配体官能化以获得更好的固定。

各种配体可以同时基质化（matrixed）到同一载体上并且该基质的设计可以进一步包括相同探针的若干复制品（图1）。

对于蛋白质配体，无需对粘合剂表面进行预处理，配体可以直接沉积（点样步骤（étape de spotting））到该表面上。

对于寡核苷酸配体（ligands oligonucléotidiques），可以进行使用多官能交联剂（优选戊二醛）的表面预处理步骤以改善固定的配体的活性。

由此，根据另一方面，本发明的主题是包含载体的复合物，所述载体的表面之一上具有粘合剂涂层，所述粘合表面例如通过交联剂的作用被官能化。在一种特定实施方案中，该配体也被官能化。

本发明的主题还是制备上述复合物的方法。

在本发明的特定实施方案中，配体在缓冲液，例如盐水缓冲液（根据用作配体的生物分子的性质选择）中稀释并使用例如非接触型压电点样仪或通过将涂布的载体浸渍在包含该配体的溶液中来沉积在涂布的载体的表面上。

当配体溶液（ligand en solution）以液滴形式沉积时，沉积液滴的尺寸以及由此在表面上形成的斑点的尺寸（50-1000微米）、斑点密度（每平方毫米1-25个）以及基质的格式可以随着期望的应用领域和生物分子的性质而改变。

官能化载体的步骤可以在配体沉积前进行，例如用交联剂如戊二醛处理该粘合表面。