[发明专利]诊断方法

说明书

相关申请案的交叉参考

本申请案为非临时申请案，其以引用的方式将第61/429,892号美国临时申请案以及第61/524,630号美国临时申请案并入本文中，并且要求它们的优先权。

技术领域

大体上，本发明涉及诊断分析系统的领域，具体而言可用于自身免疫疾病的诊断和评估，确切地说，本发明涉及用于进行自身抗体诊断分析的新颖方法。

背景技术

抗体是身体响应于入侵或者感染性物质而生成的蛋白质。它们是身体保护其自身免于生病的多种方法中的一种。在正常的情况下，身体可以区分出“外来物”与“自身”组织，因此只针对是身体的“外来物”的那些物质生成抗体。

当身体开始为其自身的组织生成抗体时就形成了自身免疫性。存在多种类型的自身免疫疾病；一些是系统性的，而其他的是器官特异性的。引起这些疾病的确切的机制还没有被完全地理解。一些疾病可容易治好并且仅带给病人最小的影响，而其他的疾病可能相当严重并且甚至是致命的。

与自身免疫疾病的发作相关联的症状可以是多种多样的。并且，任何早期的症状都可能会伪装成许多其他疾病的症状。通常，如果病人因为自身免疫疾病的疑似症状而去看医生的话，那么医生通常会建议进行抗核抗体（ANA）检测。ANA检测是良好的“第一轮”筛选检测，以观察某人是否具有自身组织的抗体。ANA筛选检测存在许多种不同的版本。方法学可以包括从蛋白质印迹到复杂的微颗粒阵列；然而，最受欢迎的方法大概是荧光抗核抗体分析（FANA）。

目前，市场上最受欢迎的FANA检测是所谓的HEp-2 FANA的检测。HEp-2是一种连续的人类上皮细胞系，该细胞系可以快速地生长并且容易附接到固体表面，例如，组织培养瓶以及载玻片。HEp-2细胞还具有较大的轮廓明显的细胞核。HEp-2 FANA检测是通过在载玻片上培养HEp-2细胞并且将所述细胞永久地固定在所述载玻片的表面上来进行。分析则通过使病人的血清样品与所述细胞反应来进行。如果存在抗核抗体的话，那么它们将结合到所述细胞上。对载玻片进行冲洗并且用标记有荧光标记的抗人免疫球蛋白（Ig）来标记抗体。在使用适当配备的显微镜来观察时，可以观察到与特定的自身免疫疾病相关联的特定的反应图案。这些图案的实例示于附图的图1中。

在ANA检测中使用的自身抗原代表了大多数，但并非全部的在HEp-2细胞上表达的已知的自身抗原。在HEp-2细胞上发现的一些自身抗原并没有出现在多重的悬浊液中。因此，多重微珠方法（multiplex bead method），例如，AtheNA Multi-Lyte ANA检测系统（可从美国新泽西州布里奇沃特的宙斯科学公司（Zeus Scientific,Inc.）购得），含有建立在Luminex xMAP平台（可从美国德克萨斯州奥斯汀的卢米奈科斯公司（Luminex Corporation）购得）上的微珠混合物，方法是仅使用结合到单独的微球上的高度纯化的自身抗原混合物并且进行多重分析。该系统具有大多数但并非全部的在HEp-2细胞上发现的自身抗原。因此，所期望的是包括实际上的HEp-2细胞以及多重微珠混合物，以确保可以基本上同时地针对所有潜在的自身抗原（所有已知的以及还未知的自身抗原）对病人的样品进行检测。然而，虽然这些类型的复杂ANA检测与使用HEp-2细胞的传统FANA相比通常更加具有针对性，但是它们可能被认为是不够敏感的，这是因为它们并入了受到限制的且数目有限的抗原。总之，这些自身抗原代表了在HEp-2细胞中表达的绝大多数已知的自身抗原，然而，理论上，天然的HEp-2细胞供应的是可能存在于体内的任何以及所有的自身抗原。

虽然HEp-2 FANA方法是参考方法，但是上述AtheNA Multi-Lyte ANA检测系统提供了基本上等效的结果，并且一些观点认为在ANA的筛选中ANA多重阵列是足够的，并且还有一些观点认为只有HEp2细胞才是足够的。然而，通常认可的是，按照可以接受的筛选方法，从多重阵列中提供特定的数据会是非常有价值的。

发明内容