[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒的商业化规模生产方法

权利要求书

1.一种商业化规模生产猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法，其包括：

a)在生物反应器中用允许PRRSV感染的哺乳动物细胞系接种大规模培养基的同时，用PRRSV感染所述哺乳动物细胞；

b)感染后使病毒繁殖5至7天；

c)通过自所述生物反应器移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第一次收获步骤；

d)补充所述生物反应器中的培养基，且使病毒繁殖1至4天；

e)通过自所述生物反应器移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第二次收获步骤；

f)补充所述生物反应器中的培养基，且使病毒繁殖1至4天；及

g)通过自所述生物反应器移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第三次收获步骤。

2.权利要求1的方法，其在第三次收获步骤之后进一步包括至少一次再进料及收获步骤，该步骤包括补充所述生物反应器中的培养基且使病毒繁殖1至4天，且通过自所述生物反应器移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第四次收获步骤。

3.权利要求1的方法，其中目标感染倍率(MOI)为0.01至0.30并且种植密度。

4.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物细胞以每个300L生物反应器中约7×10⁸个至1.0×10⁹个的密度种植。

5.权利要求4的方法，其中所述细胞种植密度为每个300L生物反应器中约1.0×10⁹个。

6.权利要求5的方法，其中所述MOI为约7×10⁸个病毒粒子。

7.权利要求1的方法，其包括监测所述培养基的右旋糖浓度，其中所述第一次收获步骤在培养基的右旋糖浓度降至小于0.1g/L的第一天进行。

8.权利要求1的方法，其中所述第二次收获在用培养基再进料后1或2天进行。

9.权利要求1的方法，其中所述第三次收获在用培养基第二次再进料后1至4天进行。

10.权利要求1的方法，其中在添加所述哺乳动物细胞系及所述PRRS的前一天或同一天，将培养基添加至生物反应器中。

11.权利要求1的方法，其中在添加所述哺乳动物细胞系及所述PRRS的前一天，将培养基添加至生物反应器中。

12.权利要求1的方法，其中所述生物反应器的温度设定在34℃至38℃。

13.权利要求1的方法，其中所述培养基包含5体积%经照射的胎牛血清。

14.权利要求1的方法，其中所述PRRSV选自：PRRSV株94881、VR2332、莱利斯塔病毒株(莱利斯塔物质(CDI-NL-2.91))，或其他株，如保藏在登录号ECACC04102703、ECACC04102702、ECACC04102704、CNCM登录号I-1140、CNCM登录号I-1387、CNCM登录号I-1388、ATCC VR2332、VR2385、VR2386、VR2429、VR2474及VR2402；CNCM I-1102、CNCM I-1140、CNCM I-1387、CNCM I-1388或ECACC V93070108；ATCC登录号VR-2332、ATCC登录号VR-2368；ATCC VR-2495；ATCC VR2385、ATCC VR2386、ATCC VR2429、ATCC VR2474及ATCC VR2402下的株。

15.一种用于制备PRRSV的商业化规模生产方法，其包括：

a.将允许所述PRRSV感染的哺乳动物细胞与所述PRRSV两者同时接种至含有适于所述细胞生长的培养基的生物反应器中；及

b.进行三次收获PRRSV的连续收获步骤，其中分别在第一次及第二次收获后补充培养基，且其中：

i.第一次收获在培养基的右旋糖浓度降至小于0.1g/L的第一天进行；

ii.第二次收获在第一次收获后添加培养基之后1或2天进行；及

iii.第三次收获在第二次收获后添加培养基之后1至4天进行。

16.一种PRRSV MLV，其包含权利要求1至16中任一项的方法制备的PRRSV，用可接受的佐剂或载体调配以递送给猪。

17.一种商业化规模生产猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法，其包括：

a)在滚瓶中用允许PRRSV感染的哺乳动物细胞系接种大规模培养基的同时，用PRRSV感染所述哺乳动物细胞；

b)感染后使病毒繁殖5至7天；

c)通过自所述滚瓶移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第一次收获步骤；

d)补充所述滚瓶中的培养基，且使病毒繁殖约2天；

e)通过自所述滚瓶移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第二次收获步骤；

f)补充所述滚瓶中的培养基，且使病毒繁殖约2天；及

g)通过自所述生物反应器移除培养基且自其分离所繁殖的病毒，进行第三次收获步骤。