[发明专利]新型WNT组合物和该组合物的治疗用途

说明书

关于序列表的声明

提供以文本格式替代纸质副本的本申请的序列表，据此通过引用并入说明书。包含序列表的文本文件的名称为FATE_095_00WO_ST25.txt。文本文件的大小为124KB，创建于2011年1月11日并通过EFS-Web系统电子提交。

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)的规定，要求2012年1月11日提交的美国临时专利申请第61/431,701号的权益，通过引用将其整体并入本文。

背景

技术领域

本发明大体涉及新型Wnt组合物及利用所述新型Wnt组合物的治疗方法。本发明的Wnt多肽及其组合物在治疗方面可用于，例如通过促进干细胞扩增和肌肉肥大促进肌肉再生。

相关领域的描述

Wnt基因家族编码二十多种富含半胱氨酸的分泌型Wnt信号糖蛋白，这些蛋白通过结合靶细胞上的佛力子（Fzd）受体而起作用。佛力子受体是G-蛋白偶联受体蛋白家族。Wnt家族的不同成员与Fzd家族某些成员的结合可通过数条不同通路之一启动信号转导。在“经典通路”中，信号分子散乱蛋白（Disheveled）的激活导致糖原合成酶激酶-3（GSK-3β）的失活，所述糖原合成酶激酶-3是一种胞质丝氨酸-苏氨酸激酶。GSK-3β的靶标β-连环蛋白进而被稳定并易位至细胞核，在细胞核中，β-连环蛋白激活特定启动子的TCF（T-细胞因子）依赖型转录(Wodarz,1998,Dierick,1999)。“非经典”Wnt通路激活包括Wnt和Fzd间的一组相互作用，其可激活Ca²⁺通路信号转导和可能的PI3K信号转导、Rho通路信号转导以及平面细胞极性（PCP）通路信号转导。

Wnt是分泌型糖蛋白，其作为在多种原始细胞类型中有活性的旁分泌或自分泌信号而起作用。虽然Wnt蛋白从细胞中分泌，但是发现它们是疏水的，并且通过在保守的半胱氨酸残基和保守的丝氨酸残基处添加脂质部分进行翻译后修饰。这些脂质修饰对Wnt蛋白的生物活性和分泌的重要性被广泛接受。然而，去垢剂脂化和脂化Wnt的低溶解性与配制过程中没有使用去垢剂时的低产率有关，从而出现了Wnt临床规模生产的独特挑战。因此，尽管Wnt在多种临床环境的治疗应用中具有巨大潜力，但Wnt的治疗潜力由于Wnt的不溶性以及相应的不足以作为纯化的、生物活性制剂生产而未被充分了解。

因此，该领域需要保留Wnt生物活性的可溶的、新型Wnt多肽，产生临床规模的新型Wnt的方法以及使用新型Wnt促进组织形成、再生、维持和修复的方法。

发明概述

本发明提供修饰的Wnt多肽，其包含降低Wnt多肽脂化的一个或多个氨基酸。在具体实施方式中，所述Wnt多肽包含降低Wnt多肽脂化的一个或多个氨基酸的缺失、插入或取代。

在一个实施方式中，多肽为激活非经典Wnt信号转导通路的Wnt多肽。

在具体实施方式中，激活非经典Wnt信号转导通路的Wnt多肽选自：Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、和Wnt11。

在本发明的一些实施方式中，多肽是Wnt7a或Wnt5a多肽。

在具体实施方式中，本发明提供了修饰的Wnt7a多肽，其相对于对应SEQ ID NO：2和6-11中任一个的Wnt7a多肽的脂化具有降低的脂化。在其他实施方式中，本发明提供的修饰的Wnt7a多肽在相应于SEQ ID NO：2和6-11中任一个的第73位的氨基酸位置处包含氨基酸缺失、插入、或取代。在一些实施方式中，本发明提供的Wnt7a多肽在相应于SEQ ID NO：2和6-11中任一个的第206位的氨基酸位置处包含氨基酸缺失、插入、或取代。在具体实施方式中，本发明提供的Wnt7a多肽在相应于SEQ ID NO：2和6-11中任一个的第73位和第206位的氨基酸位置处包含氨基酸缺失、插入、或取代。

在一些实施方式中，本发明提供的Wnt7a多肽在相应于SEQ ID NO：2和6-11中任一个的第73位或第206位的氨基酸位置处包含丙氨酸。在其他实施方式中，本发明提供的Wnt7a多肽在相应于SEQ ID NO：2和6-11中任一个的第73位和第206位的氨基酸位置处包含丙氨酸。本发明还提供了包含本文中任一实施方式的组合物，其中所述Wnt7a多肽是人或小鼠Wnt7a多肽。