[发明专利]苏木精染色方法

说明书

发明领域

本发明涉及用于将生物学样品染色的方法，并且具体地涉及用于将生物学样品用苏木精染剂染色的自动化方法。

发明背景

数种组织化学染色方案（包括苏木精和曙红（H&E）染色以及帕帕尼古劳法（Papanicolaou，PAP）染色）均依赖于染料苏木精来将细胞学和组织样品染色。具体地，用苏木精染色细胞核被病理学家用来检测肿瘤活组织检查样品中恶性和/或转移性细胞的存在。

苏木精是在苏木属（Hematoxylon）的树的红色心材中发现的一种天然存在的化合物。苏木精本身在水性溶液中是无色的，并且不是将组织组分染色的活性成分。取而代之的是，苏木精的氧化产物苏木因成为苏木精染料溶液的活性染色组分，尤其是在与媒染剂络合时。苏木因经由暴露于空气和日光而天然生成。此天然方法称为“熟成（ripening）”，并且可能要3个月或更多个月以提供适合染色细胞的溶液。

自动化的染色规程和系统使用机械系统来向生物学样品投递染色溶液。标准的苏木因染色规程利用含有苏木精/苏木因和媒染剂二者的预混合的储液。在这些预混合的储液中形成沉淀物。对于在容器（如玻璃容器）中用苏木精染色溶液处理载玻片的手动染色规程，这一般不是问题。然而，对于其中沉淀物会弄脏或阻塞投递管线的自动化染色系统，沉淀物是个问题，并且其使得清洁或净化投递管线较为困难。苏木精染色溶液的这些变化可能导致染色不一致。例如，经常允许含有媒染剂的苏木精染色储液熟化延长的一段时间，从而允许形成苏木因-媒染剂复合物。尽管此方法可能允许好的染色结果，但它也导致形成不想要的沉淀物。与金属的接触使得沉淀加剧。这对于含有开口直径非常小、可能被沉淀物堵塞的金属部件如喷管和喷头的自动化系统来说尤成问题。

因此，存在开发与自动化样品加工相容的苏木精染色规程的需要。

发明概述

本发明涉及用于将生物学样品染色的方法，并且具体地涉及用于将生物学样品用苏木精染剂染色的自动化方法。

在一些实施方案中，本发明提供用于将包含细胞的生物学样品染色的方法，其包括：提供分开的苏木因和媒染剂溶液；通过混合分开的苏木因和媒染剂溶液来制备新鲜的苏木因-媒染剂溶液；并将生物学样品与新鲜的苏木因-媒染剂溶液在将生物学样品的细胞中的结构染色的条件下接触。在一些实施方案中，在应用于生物学样品之前将苏木因和媒染剂溶液混合达选自下组的一段时间：小于约4小时、3小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟、10分钟、5分钟、1分钟、30秒和20秒。在一些实施方案中，将苏木因和媒染剂溶液作为分开的溶液应用于样品并在样品上混合以提供新鲜的苏木因-媒染剂溶液。在一些实施方案中，改变分开的苏木因和媒染剂溶液的比率以调节苏木因-媒染剂溶液的至少一种特性。在一些实施方案中，至少一种特性是染色强度。在一些实施方案中，苏木因溶液是半氧化的苏木精溶液。在一些实施方案中，半氧化的苏木精溶液包含足以氧化苏木因溶液中约50%的苏木因的量的氧化剂。在一些实施方案中，媒染剂溶液包含硫酸铝。在一些实施方案中，样品封固在载玻片上。在一些实施方案中，苏木因和媒染剂溶液包含低挥发性溶剂。在一些实施方案中，低挥发性溶剂选自下组：甘油、聚乙二醇和丙二醇。

在一些实施方案中，本发明提供用于将包含细胞的生物学样品染色的方法，包括：提供分开的苏木因和媒染剂溶液；临应用于生物学样品之前将分开的苏木因和媒染剂溶液混合以提供苏木因-媒染剂溶液；并将苏木因媒染剂溶液在将生物学样品的细胞中的结构染色的条件下应用于生物学样品。

在一些实施方案中，本发明提供用于将包含细胞的生物学样品染色的方法，包括：提供分开的苏木因和媒染剂溶液；在应用于生物学样品之前将分开的苏木因和媒染剂溶液混合达小于约30分钟的时间段以提供苏木因-媒染剂溶液；并将苏木因媒染剂溶液在将生物学样品的细胞中的结构染色的条件下应用于生物学样品。在一些实施方案中，苏木因溶液是半氧化的苏木因溶液。在一些实施方案中，媒染剂溶液包含硫酸铝。在一些实施方案中，将组织封固在载玻片上。在一些实施方案中，苏木因和媒染剂溶液包含低挥发性溶剂。在一些实施方案中，低挥发性溶剂选自下组：甘油、聚乙二醇和丙二醇。