[发明专利]用于产生蛋白复合物的方法和包含该蛋白复合物的疫苗组合物

说明书

发明领域

本发明涉及用于产生热休克蛋白复合物的方法。本发明还延及根据本发明的方法产生的热休克蛋白复合物在制备用于预防和治疗传染病和癌性病症的疫苗组合物中的用途。

发明背景

热休克蛋白（hsp，HSP）是广泛分布遍及植物和动物界的高度保守的蛋白家族。基于它们的分子量，主要的热休克蛋白被分成6个不同的家族：小(hsp20-30kDa)；hsp40；hsp60；hsp70；hsp90和hsp100。热休克蛋白在原核和真核细胞二者中遍在表达，其中它们在多肽的折叠和去折叠中行使分子伴侣的功能。热休克蛋白的另外的作用是伴随肽从一个细胞区室至另一个细胞区室和，在病变细胞的情况下，热休克蛋白还已知伴随病毒或肿瘤相关肽至细胞表面用于呈递至免疫系统。

尽管热休克蛋白最初在经受热应激的细胞中被鉴定出，但它们的产生可由一些其他形式的应激，诸如感染、渗透应激、细胞因子应激和类似的应激造成。因此，基于它们的表达不单由热应激造成，热休克蛋白还通常被称为应激蛋白（SP）。然而，由不同应激刺激诱导的基因的转录分析显示细胞暴露于不同的诱导应激的刺激之后诱导不同组的基因（Bacon&Marsh(2007)Curr.Mol.Med.7:277-86)。此外，单个应激调节子是独立被诱导（vanBogelen等人(1987)J.Bact.169:26-32和Wilkes等人(2009)Applied and Environmental Microbiol.75:981–990)并被调节的(Holmes等人(2010)Microbiology156:158-166)。特别地，vanBogelen显示了不同诱导应激的刺激引起不同的热休克蛋白基因被表达并当四种诱导应激的刺激被检测时，只有一种类型的诱导应激的刺激造成了这些基因的特异性表达。

尽管热休克蛋白本身可被用作疫苗组合物中的免疫原性决定簇，当施用至受试对象时，观察到热休克蛋白和肽、特别是抗原肽片段之间形成的复合物介导增强的免疫应答。此外，已知热休克蛋白可产生可被分类为组成型产生的热休克蛋白复合物或诱导型热休克蛋白复合物的复合物。组成型产生的热休克蛋白复合物是包含在正常稳态条件下产生的热休克蛋白的热休克蛋白复合物。诱导型热休克蛋白复合物是当细胞被暴露于应激条件时产生的。当处于应激状态时，细胞上调应激蛋白的产生，这些上调的热休克蛋白被称为诱导型热休克蛋白。此外，这些诱导型热休克蛋白与肽片段形成复合物，所述复合物被认为比细胞不处于应激条件下时形成的复合物更具免疫原性。此类诱导型热休克蛋白复合物高出组成型热休克蛋白复合物的增强的免疫原性在WO01/13943中被例证。不希望被理论束缚，本发明人预测在诱导型热休克蛋白复合物中观察到的增强的免疫原性不是由于复合物的实际的应激蛋白组分的不同，而是由于引起细胞内的蛋白去折叠或变性的应激条件。热休克蛋白因此与蛋白或蛋白片段复合以阻止它们去折叠，或再折叠它们，并与蛋白片段复合作为细胞抗原加工通路的部分。

包含热休克蛋白复合物（其还可被称为应激蛋白复合物）的疫苗组合物作为免疫原性决定簇是广为人知的。由于它们显示了给予抗感染和疾病的广泛的、保护性免疫的前景，此类疫苗具有显著的潜力。热休克蛋白复合物作为抗特定癌症的疫苗是有效的也已被广泛证明。已显示从热-休克BCG细胞中分离的源自病原体的应激蛋白复合物在被接种的宿主中诱导T-辅助性1（Th1）淋巴细胞介导的免疫应答，其在小鼠肺结核的气溶胶攻击模型中给予抗活的攻击的保护性免疫（国际PCT专利申请号WO01/13944）。此外，已在WO02/20045、WO00/10597和WO01/13943中显示了从病原体或被病原体感染的细胞中分离的应激蛋白复合物作为抗传染病的疫苗中的免疫原性决定簇是有效的。

有多种途径产生用于治疗和预防传染病的包含应激蛋白复合物的疫苗组合物。WO95/24923公开了包含源自宿主真核细胞的热休克蛋白和源自病原体的抗原肽片段的组成型热休克蛋白复合物。WO01/13943公开了在使用诱导应激的刺激诸如热或细胞因子诸如肿瘤坏死因子（TNF）之后被诱导的热休克蛋白复合物。所述应激蛋白可包含源自宿主细胞的应激蛋白，或可选地，源自入侵病原体的应激蛋白，所述应激蛋白被复合至源自入侵病原体的肽。WO01/13944公开了在经受诱导应激的刺激的病原体之后产生的应激蛋白复合物，其中该应激蛋白和相关肽片段直接源自该病原体。

发明概述