[发明专利]荧光寿命表观遗传学测定

权利要求书

1.测定受试样品中修饰酶之活性的方法，其包括：

(a)使所述受试样品与荧光受调节之酶底物相接触，所述底物包含与荧光部分和配置成调节所述荧光部分之荧光寿命的荧光寿命调节剂部分相缀合的接头分子，其中所述底物通过所述修饰酶的作用来修饰以形成经修饰底物，由于所述修饰而使得所述经修饰底物之所述接头分子在所述荧光部分与所述荧光寿命调节剂部分之间对第二种酶的切割敏感或者保护所述经修饰底物之所述接头分子在所述荧光部分与所述荧光寿命调节剂部分之间免于被第二种酶切割，其中通过所述第二种酶切割所述底物或所述经修饰底物将含有所述荧光寿命调节剂部分之所述底物的一部分与含有所述荧光部分之所述底物的一部分分开；以及

(b)通过检测由所述第二种酶对所述经修饰底物和/或所述底物之作用而引起的所述荧光部分之所述荧光寿命的变化来检测所述经修饰底物的形成，其中所述经修饰底物的形成为所述修饰酶的活性提供指示。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述荧光受调节之酶底物的所述接头分子是肽接头，并且所述第二种酶是这样的蛋白酶：其切割所述肽接头或通过所述修饰酶对所述肽接头之作用而形成的经修饰肽接头，以将含有所述荧光寿命调节剂部分之所述底物的一部分与含有所述荧光部分之所述底物的一部分分开。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述肽接头能够被所述蛋白酶切割，其中所述切割将含有所述荧光寿命调节剂部分之所述底物的一部分与含有所述荧光部分之所述底物的一部分分开，并且所述修饰酶对所述肽接头的修饰保护所述经修饰肽接头在所述荧光部分与所述荧光寿命调节剂部分之间免于被所述蛋白酶切割，与未经修饰的肽接头相比，蛋白酶处理之后所述荧光部分之所述荧光寿命的时间依赖性降低表明所述经修饰肽接头的形成。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述经修饰肽接头通过所述肽接头中氨基酸残基的甲基化来形成。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述修饰酶是蛋白质甲基转移酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述蛋白质甲基转移酶是组蛋白赖氨酸甲基转移酶(PKMT)，例如G9a、Set7/9、GLP或EZH2。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述蛋白质甲基转移酶是组蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMT)，例如PRMT1、PRMT3、PRMT4/CARM1或PRMT5。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述经修饰肽接头通过所述肽接头中氨基酸残基的乙酰化来形成。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述修饰酶是乙酰转移酶。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述乙酰转移酶是组蛋白乙酰转移酶，例如Gcn5、PCAF、Hat1或p300。

11.根据权利要求3所述的方法，其中所述经修饰肽接头通过所述肽接头中氨基酸残基的脱亚氨化来形成。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述修饰酶是脱亚氨酶。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述脱亚氨酶是肽基精氨酸脱亚氨酶，例如PAD1、PAD2、PAD3、PAD4或PAD6。

14.根据权利要求2所述的方法，其中所述肽接头在所述荧光部分与所述荧光寿命调节剂部分之间不能被所述蛋白酶切割，并且所述修饰酶对所述肽接头的修饰使得所述经修饰肽接头在所述荧光部分与所述荧光寿命调节剂部分之间对所述蛋白酶的切割敏感，与未经修饰的肽相比，蛋白酶处理之后所述荧光部分之所述荧光寿命的时间依赖性提高表明所述经修饰肽接头的形成。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述经修饰肽接头通过所述肽接头中甲基化氨基酸残基的脱甲基化来形成。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述修饰酶是脱甲基酶。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述脱甲基酶是组蛋白脱甲基酶，例如LSD1、JHDM1A或JMJD6。

18.根据权利要求14所述的方法，其中所述经修饰肽接头通过所述肽接头中乙酰化氨基酸残基的脱乙酰化来形成。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述修饰酶是脱乙酰酶。