[发明专利]包含来自基因型1b的丙型肝炎病毒基因组的核酸的核酸构建物、和导入有该核酸构建物的丙型肝炎病毒基因组复制细胞、以及感染性丙型肝炎病毒颗粒的制备方法在审
申请号: | 201280016349.3 | 申请日: | 2012-03-30 |
公开(公告)号: | CN103534351A | 公开(公告)日: | 2014-01-22 |
发明(设计)人: | 胁田隆字;田中靖人;沟上雅史 | 申请(专利权)人: | 日本国立感染症研究所;公立大学法人名古屋市立大学;东丽株式会社 |
主分类号: | C12N15/09 | 分类号: | C12N15/09;A61K39/29;A61P31/14;C07K16/10;C12N5/10;C12N7/00;C12Q1/68;C12Q1/70 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人: | 孔青;孟慧岚 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 包含 来自 基因型 肝炎 病毒 基因组 核酸 构建 导入 复制 细胞 以及 感染性 颗粒 制备 方法 | ||
1. 核酸,其包含序列表的SEQ ID NO: 1所示核苷酸序列,其中,当该核酸为RNA时,将SEQ ID NO: 1所示核苷酸序列中的胸腺嘧啶t理解成尿嘧啶u。
2. 核酸,其是在权利要求1所述核酸的核苷酸序列中具有突变的核酸,当以序列表的SEQ ID NO: 14所示氨基酸序列为基准时,具有引起下述(i)或(ii)的取代的突变,所述的SEQ ID NO: 14所示氨基酸序列为由序列表的SEQ ID NO: 1所示核苷酸编号342~9374的序列编码的氨基酸序列,
(i) 第2197位的丝氨酸取代成酪氨酸;
(ii) 第2204位的丝氨酸取代成甘氨酸。
3. 核酸,其是在权利要求2所述核酸的核苷酸序列中具有突变的核酸,当以序列表的SEQ ID NO: 14所示氨基酸序列为基准时,具有引起下述(iii)的取代的突变,所述的SEQ ID NO: 14所示氨基酸序列为由序列表的SEQ ID NO: 1所示核苷酸编号342~9374的序列编码的氨基酸序列,
(iii) 第1202位的谷氨酸取代成甘氨酸。
4. 丙型肝炎病毒,其中含有权利要求2或3所述的核酸作为病毒基因组。
5. 核酸,其从5’侧朝着3’侧依次包含来自两种以上的丙型肝炎病毒基因组的分别编码核心蛋白、E1蛋白、E2蛋白、p7蛋白、NS2蛋白、NS3蛋白、NS4A蛋白、NS4B蛋白、NS5A蛋白和NS5B蛋白的核苷酸序列,其中,编码NS3蛋白、NS4A蛋白、NS4B蛋白、NS5A蛋白和NS5B蛋白的各核苷酸序列来自权利要求2或3所述的核酸。
6. 权利要求5所述的核酸,其中,编码NS2蛋白的核苷酸序列的至少一部分来自权利要求2或3所述的核酸。
7. 权利要求5或6所述的核酸,其中,在编码上述核心蛋白的核苷酸序列的5’侧包含丙型肝炎病毒基因组的5’非翻译区;
在编码上述NS5B蛋白的核苷酸序列的3’侧包含来自权利要求2或3所述的核酸的3’非翻译区。
8. 权利要求5~7中任一项所述的核酸,其中,上述两种以上的丙型肝炎病毒基因组包含JFH-1株、J6CF株或TH株的基因组。
9. 丙型肝炎病毒,其含有权利要求5~8中任一项所述的核酸作为病毒基因组。
10. 丙型肝炎病毒的全基因组复制子RNA,其包含权利要求2、3或5~8中任一项所述的核酸。
11. 表达载体,其包含权利要求2、3或5~8中任一项所述的核酸。
12. 细胞,该细胞被导入权利要求2、3或5~8中任一项所述的核酸或权利要求10所述的全基因组复制子RNA,或者被感染权利要求4或9所述的丙型肝炎病毒,而产生丙型肝炎病毒颗粒。
13. 丙型肝炎病毒疫苗,其中含有权利要求4或9所述的丙型肝炎病毒或其一部分。
14. 丙型肝炎病毒的中和抗体,该中和抗体将权利要求4或9所述的丙型肝炎病毒识别为抗原。
15. 筛选抗丙型肝炎病毒物质的方法,该方法具备下述步骤:
培养步骤:在受检物质的存在下和不存在下,培养权利要求12所述的细胞、或者权利要求4或9所述的丙型肝炎病毒与丙型肝炎病毒敏感性细胞的混合物;
定量步骤:定量上述培养步骤中在培养物中得到的来自丙型肝炎病毒的RNA或丙型肝炎病毒颗粒的量;以及
评价步骤:上述定量步骤的结果,当在上述受检物质的存在下培养的培养物中检测到的来自丙型肝炎病毒的RNA或丙型肝炎病毒颗粒的量较在上述受检物质的不存在下培养的培养物中检测到的来自丙型肝炎病毒的RNA或丙型肝炎病毒颗粒的量少时,评价为上述受检物质具有抗丙型肝炎病毒活性。
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