[发明专利]用于丁二烯生物合成的微生物和方法

权利要求书

1.一种用于生产丁二烯的方法：

（a）在足够量的营养物质和培养基中通过发酵培养产生巴豆醇的非天然存在的微生物；以及

（b）将通过培养所述非天然存在的微生物所产生的巴豆醇转化为丁二烯。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（b）在催化剂的存在下通过化学脱水执行。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非天然存在的微生物包很含巴豆醇途径，该巴豆醇途径包括编码巴豆醇途径酶的以足以产生巴豆醇的量表达至少一种外源性核酸，所述巴豆醇途径包括乙酰基-CoA:乙酰基-CoA酰基转移酶；乙酰乙酰基-CoA还原酶；3-羟基丁酰基-CoA脱水酶；巴豆酰基-CoA还原酶（醛形成）；巴豆醛还原酶（醇形成）；巴豆酰基-CoA水解酶、合成酶或者转移酶；巴豆酸酯还原酶；巴豆酰基-CoA还原酶（醇形成）；戊烯二酰基-CoA脱羧酶；戊二酰基-CoA脱氢酶；3-氨基丁酰基-CoA脱氨酶；或者4-羟基丁酰基-CoA脱水酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述微生物包含两种外源性核酸，每种均编码巴豆醇途径酶。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述微生物包含三种外源性核酸，每种均编码巴豆醇途径酶。

6.根据权利要求3所述的方法，其中，所述微生物包含四种外源性核酸，每种均编码巴豆醇途径酶。

7.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括乙酰基-CoA:乙酰基-CoA酰基转移酶、乙酰乙酰基-CoA还原酶、3-羟基丁酰基-CoA脱水酶、巴豆酰基-CoA还原酶（醛形成）和巴豆醛还原酶（醇形成）。

8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括乙酰基-CoA:乙酰基-CoA酰基转移酶、乙酰乙酰基-CoA还原酶、3-羟基丁酰基-CoA脱水酶和巴豆酰基-CoA还原酶（醇形成）。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括乙酰基-CoA:乙酰基-CoA酰基转移酶；乙酰乙酰基-CoA还原酶；3-羟基丁酰基-CoA脱水酶；巴豆醛还原酶（醇形成）；巴豆酰基-CoA水解酶、合成酶或者转移酶；以及巴豆酸酯还原酶。

10.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括戊烯二酰基-CoA脱羧酶、巴豆酰基-CoA还原酶（醛形成）和巴豆醛还原酶（醇形成）。

11.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括戊烯二酰基-CoA脱羧酶和巴豆酰基-CoA还原酶（醇形成）。

12.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括戊烯二酰基-CoA脱羧酶；巴豆醛还原酶（醇形成）；巴豆酰基-CoA水解酶、合成酶或者转移酶；以及巴豆酸酯还原酶。

13.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括戊二酰基-CoA脱氢酶、巴豆酰基-CoA还原酶（醛形成）和巴豆醛还原酶（醇形成）。

14.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括戊二酰基-CoA脱氢酶和巴豆酰基-CoA还原酶（醇形成）。

15.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括戊二酰基-CoA脱氢酶；巴豆醛还原酶（醇形成）；巴豆酰基-CoA水解酶、合成酶或者转移酶以及巴豆酸酯还原酶。

16.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括3-氨基丁酰基-CoA脱氨酶、巴豆酰基-CoA还原酶（醛形成）和巴豆醛还原酶（醇形成）。

17.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括3-氨基丁酰基-CoA脱氨酶和巴豆酰基-CoA还原酶（醇形成）。

18.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括3-氨基丁酰基-CoA脱氨酶；巴豆醛还原酶（醇形成）；巴豆酰基-CoA水解酶、合成酶或者转移酶以及巴豆酸酯还原酶。

19.根据权利要求3所述的方法，其中，所述巴豆醇途径包括4-羟基丁酰基-CoA脱水酶、巴豆酰基-CoA还原酶（醛形成）和巴豆醛还原酶（醇形成）。