[发明专利]具有粘度改变表型的丝状真菌

说明书

优先权

本专利申请要求二者均于2011年4月22日提交的系列号为61/478,160和61/478,162的美国临时申请和各自于2011年4月29日提交的系列号为61/480,602、61/480,610和61/480,629的美国临时申请的优先权，特此这些申请案以引用的方式全文并入本文。

技术领域

本发明的菌株和方法涉及丝状真菌中的基因突变，该基因突变产生具有改变的生长特性的菌株变体。这种变体非常适于在深层培养中生长，例如用于大规模生产用于商业应用的酶和其他蛋白质或代谢物。

背景技术

丝状真菌能够高水平表达天然和异源蛋白质，从而使得它们非常适于大规模生产用于工业应用、医药应用、动物健康应用以及食品和饮料应用的酶和其他蛋白质。通常在生物反应器中在菌丝体深层培养中培养丝状真菌，所述生物反应器适于将氧气和营养物质引入和分布进培养基(即发酵液)中。菌丝体的形态特征影响发酵液的流变特性，从而影响生物反应器性能。

一般来讲，发酵液的粘度越高，氧气和营养物质的分布越不均匀，搅拌培养物所需的能量越高。在一些情况下，发酵液的粘度变得足够高而明显妨碍氧气和营养物质的溶解，从而不利地影响真菌的生长。另外，混合粘稠发酵液以及对粘稠发酵液进行充气所需的能量可大大增加生产成本，以及招致在马达和电源供应方面的资本支出较高。

发明内容

本发明描述了涉及丝状真菌的菌株和方法，所述丝状真菌具有产生粘度改变表型的遗传变更。

在一个方面，提供衍生自亲本株的丝状真菌变异株，该变异株包含能使变异株的细胞与亲本株的细胞相比产生改变量的功能性Gasl蛋白的遗传变更，其中变异株的细胞在深层培养有氧发酵过程中，(i)与亲本株的细胞相比，产生出需要改变的搅拌量来维持预选的溶氧量的细胞发酵液，和/或(ii)与亲本株的细胞相比，产生出在预选的搅拌量下维持改变的溶氧量的细胞发酵液。

在一些实施例中，功能性Gasl蛋白的改变量为减少量，并且变异株在深层培养有氧发酵过程中，(i)与亲本株的细胞相比，产生出需要减少的搅拌量来维持预选的溶氧量的细胞发酵液，和/或(ii)与亲本株的细胞相比，在预选的搅拌量下维持增加的溶氧量的细胞发酵液。

在一些实施例中，遗传变更包含亲本株中所存在的gasl基因的破坏。在一些实施例中，破坏gasl基因是缺失gasl基因的全部或部分所致。在一些实施例中，破坏gasl基因是缺失包含gasl基因的基因组DNA的一部分所致。在一些实施例中，破坏gasl基因是诱变gasl基因所致。

在一些实施例中，破坏gasl基因是用位点特异性重组进行。在一些实施例中，破坏gasl基因是与在gasl基因的遗传基因座处引入选择性标记相结合来进行。

在一些实施例中，变异株不产生功能性Gasl蛋白。在一些实施例中，变异株不产生Gasl蛋白。

在一些实施例中，变异株还包含编码所关注的蛋白质的基因。在一些实施例中，变异株还含sfb3基因的破坏。在一些实施例中，变异株还包含sebl基因的破坏。在一些实施例中，变异株还包含sfb3基因和sebl基因的破坏。在一些实施例中，变异株还包含至少一个选自如下的基因的破坏：sfb3基因、sebl基因、mpgl基因、crzl基因和tps2基因。在一些实施例中，变异株每单位量生物质产生与亲本株基本上相同量或更多的蛋白质。