[发明专利]循环生物标志物

权利要求书

1.一种检测生物样品中的一种或多种生物标志物的方法，其包括：

(a)使生物样品与设计用于确定所述一种或多种生物标志物的存在或水平的试剂接触，其中所述一种或多种生物标志物选自图1-60或表3-10、12-17、19-20、22、26、28-50、52、54-64、66、67、69-71、73-85、89-92任一个中的生物标志物及其组合；及

(b)鉴定所述生物样品中的所述一种或多种生物标志物，从而检测所述生物样品中的所述一种或多种生物标志物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包括生物流体。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述生物流体包含外周血、血清、血浆、腹水、尿液、脑脊液(CSF)、痰、唾液、骨髓、滑液、房水、羊水、耵聍、母乳、支气管肺泡灌洗液、精液、前列腺液、考珀液或射精前液、女性射出液、汗液、粪便物、毛发、泪液、囊液、胸膜液和腹膜液、心包液、淋巴、食糜、乳糜、胆汁、间隙液、经血、脓、皮脂、呕吐物、阴道分泌物、粘膜分泌物、粪便水、胰液、窦腔灌洗液、支气管肺抽出物、囊胚腔液或脐带血。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述生物流体包含血液或血液衍生物。

5.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述生物样品包含细胞外微囊泡群体。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述微囊泡群体包含具有10nm至1000nm的直径的微囊泡。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述微囊泡群体包含具有20nm至200nm的直径的微囊泡。

8.如权利要求5所述的方法，其中在所述鉴定步骤之前将所述微囊泡群体从所述生物样品中分离出来。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述分离包括大小排阻色谱法、密度梯度离心、差速离心、纳米膜超滤、免疫吸附捕获、亲和选择、亲和纯化、亲和捕获、免疫测定、免疫沉淀、微流体分离、流式细胞术或其组合。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述亲和选择包括使所述微囊泡群体与一种或多种结合剂接触。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述一种或多种结合剂包含核酸、DNA分子、RNA分子、抗体、抗体片段、适体、类肽、zDNA、肽核酸(PNA)、锁定核酸(LNA)、凝集素、肽、树状聚体、膜蛋白标记剂、化学化合物或其组合。

12.如权利要求10所述的方法，其中所述一种或多种结合剂用于捕获和/或检测所述微囊泡群体。

13.如权利要求10所述的方法，其中所述一种或多种结合剂特异性地结合选自四跨膜蛋白、CD9、CD31、CD63、CD81、CD82、CD37、CD53、Rab-5b、膜联蛋白V、MFG-E8、图1-60或表3-10、12-17、19-20、22、26、28-50、52、54-64、66、67、69-71、73-85、89-92任一个中的生物标志物及其组合的微囊泡表面标志物。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述一种或多种结合剂结合至基底。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述基底包括孔、微珠和/或阵列。

16.如权利要求12所述的方法，其中一种或多种结合剂具有标记。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述标记选自磁标记、荧光标记、酶标记、放射性同位素、量子点或其组合。

18.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含多肽或其功能性片段。

19.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含微囊泡表面抗原或其功能性片段。

20.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含核酸或其功能性片段。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述核酸包含mRNA。

22.如权利要求20所述的方法，其中所述核酸包含微RNA。

23.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含多肽和核酸分子，或其功能性片段。