[发明专利]用于筛选能够增强或抑制OATP1B1转运活性的化合物的方法、及用于确定OATP1B1表达水平的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用一种荧光化合物二氯荧光素筛选增强或抑制OATP1B1转运活性的化合物的方法，并且涉及一种用于测量OATP1B1表达水平的方法。 

背景技术

近年来，已经日益认识到肝细胞在药物发现中起重要作用。肝细胞是用于药物的药代动力学研究，如药物的体内清除的预测或药物相互作用的研究的必不可少的工具。已经揭示了在肝细胞中表达并且在药物的药代动力学（吸收、分配、代谢、以及排泄）中占主导作用的各种代谢酶以及转运蛋白的分子机制。在它们之中，大部分注意力已经集中到有机阴离子-转运多肽（OATP）在阴离子药物的药代动力学中的作用上（非专利文献1）。 

OATP家族转运蛋白在身体的不同组织和器官，如小肠、肾、以及肝中表达，并且在它们之中，已知OATP1B1（别名：OATP-C、OATP2、或LST-1）、OATP1B3（别名：OATP-8）、以及OATP2B1（别名：OATP-B）在人肝细胞中是高度表达的（非专利文献2和3）。已知临床上重要的药物如他汀类以及血管紧张素II受体阻滞剂经由OATP1B1被人肝细胞吸收，并且已知环孢霉素以及利福平是典型的OATP1B1抑制剂（非专利文献2）。 

已知OATP1B1底物药（substrate drug）与OATP1B1抑制剂的同时使用减少进入肝中的底物药的吸收，致使该底物药在临床环境中的血中浓度增加。因此，从临床安全性的角度出发，经由OATP1B1对一种试验化合物的药物相互作用潜能进行评估是非常重要的。常规上，为了定量评估一种试验化合物的转运蛋白-介导的药物相互作用潜能，使用标记有放射性同位素的已知底物的评估方法是已知的（RI法）（专利文献1）。 

RI法具有高灵敏度，但是价格昂贵，并且在处理样品时还要求谨慎。作为替代，不使用放射性同位素，而是使用荧光化合物的检测方法也是已知的（荧光法）。例如，已经报道了一种使用6-羧基荧光素（6-CFL）的评估方法，该荧光素是一种良好的针对有机阴离子转运蛋白1（OAT1）的底物（非专利文献4）。 

可以说荧光法易于操作，比RI法花费少，且具有优异的通过量。然而，一般而言，很难预测一种化合物是否能够用作一种转运蛋白的底物，并且，因此，已知可以用作阴离子转运蛋白底物的荧光化合物不多。另外，一些常规的荧光底物具有多种缺点，如由于底物本身发射的低荧光强度、试验化合物的自发荧光、以及荧光底物的光漂白，探测灵敏度不一定高。 

引用清单 

专利文献 

专利文献1：日本专利申请公开号2006-340610 

非专利文献 

非专利文献1：马修G.索尔斯（Matthew G.Soars）等人，《化学生物学相互作用》（Chemico-Biological Interactions），168，（2007）pp.2-15 

非专利文献2：凯瑟琳M.嘉科米尼（Kathleen M.Giacomini）等人，《自 然评论药物发现》（Nature Reviews Drug Discovery），第9卷，pp.215-236,2010 

非专利文献3：项邦妮（Bonnie Hsiang）等人，《生物化学杂志》（J.Biol.Chem.），第274卷，pp.37161-37168,1999 

非专利文献4：托马斯席拉尔（Tomas Cihlar）等人，《分析生物化学》（Analytical Biochemistry），283,pp.49-55,2000 

发明概述 

技术问题 

因此，考虑到与常规RI法相关联的问题，本发明的一个目的在于提供一种使用荧光化合物筛选增强或抑制OATP1B1的转运活性的化合物的方法，该方法安全、花费低廉、并且易于操作且允许具有堪比RI法的检测灵敏度，并且还在于提供一种用于测量OATP1B1表达水平的方法。 

问题的解决方案 

为了解决以上问题，诸位发明人已经针对用作OATP底物的多种荧光化合物研究了它们的适应性。结果是，揭示了二氯荧光素（DCF）是一种优异的OATP1B1底物，并且还出人意料地发现使用DCF作为OATP1B1底物进行的评估结果与通过常规RI法得到的结果等效，并且完成了本发明。 

即，本发明提供了一种使用二氯荧光素筛选增强或抑制OATP1B1的转运活性的化合物的方法。