[发明专利]新的EGFR结合蛋白

说明书

本申请基于2011年4月7日提交的美国临时申请序号61/473,014并且要求其权益，美国临时申请序号61/473,014明确通过引用整体并入本文。

序列表的引用

本申请与电子形式的序列表一起提交。序列表作为名称为A-1628-WO-PCT_SeqList.txt的文件提供，该文件创建于2012年4月6日，大小为14KB。电子形式的序列表中的信息通过引用整体并入本文。

发明背景

表皮生长因子受体(还称为“EGFR”、“ErbB受体”或“ErbB1受体”)是属于ErbB受体家族的受体蛋白酪氨酸激酶。ErbB受体家族包括ErbB(还称为ErbB1或Her-1受体)、ErbB2(Her-2受体)、ErbB3(Her-3受体)和ErbB4(Her-4受体)以及该家族的其他成员。因此，术语“ErbB1”、“ErbB1受体”、“ErbB受体”、“表皮生长因子受体”和“EGFR”在本文可互换使用，并且指例如Carpenter等人Ann.Rev.Biochem.56：881-914(1987)中公开的EGFR，包括其天然存在的突变体形式(例如，如Humphrey等人PNAS(USA)87：4207-4211(1990)中的缺失突变体EGFR)。还会理解，如本文使用的，“EGFR”可以是天然序列EGFR或其氨基酸序列变体。

EGFR一般包含可结合ErbB配体(例如EGF、TGF-α等)的细胞外结构域；亲脂性跨膜结构域；保守的细胞内酪氨酸激酶结构域；和具有可被磷酸化的几个酪氨酸残基的羧基末端信号传导结构域。

EGFR及其配体表皮生长因子(“EGF”)已经牵涉入细胞增殖和许多类型的癌症(包括人类实体瘤)。参见例如Mendelsohn，Cancer Cell，7：359(1989)；Mendelsohn，Cancer Biology1：339-344(1990)，Modjtahedi和Dean Int'l，J.Oncology4：277-296(1994)。这包括肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、脑癌、膀胱癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。Modjtahedi和Dean，Int'lJ.Oncology4：277-296(1994)。

许多抗EGFR抗体可商业途径获得，或者目前处于临床开发中。此类抗体包括但不限于(帕尼单抗)、(西妥昔单抗)；扎鲁木单抗、尼妥珠单抗和马妥珠单抗。

帕尼单抗(以商品名销售)是人类抗EGFR单克隆抗体，在美国、欧洲、日本和世界上的许多其他国家被批准用于转移性结肠直肠癌(mCRC)的某种治疗。帕尼单抗的核酸和氨基酸序列是已知的，并且可以特别参见美国专利号6,235,883和7,807,798(Jakobovits等人)。这些专利的内容通过引用整体并入本文。帕尼单抗的重链(γ)序列在本文以Seq Id No.1示出。帕尼单抗的轻链(κ)序列在本文以Seq Id No.2示出。如本文使用的，术语“AMG954”指(帕尼单抗)。

某些氨基酸残基的异构化是抗体中观察到的现象。例如，Wakankar等人发现两个重组单克隆抗体的轻链互补决定区(CDR)中的某些天冬氨酸残基(Asp)易受这种异构化。具体地，这些抗体中的天冬氨酸(Asp)异构化导致这些抗体的异天冬氨酸(IsoAsp)和环酰亚胺(Asu)变体的形成。参见Wakankar等人，Biochemistry,2007年2月13日；46(6)：1534-44(2007年1月)。发现这些变体的形成降低这些抗体的结合亲和力，从而降低其效价。同上。

已经针对(帕尼单抗)发现了某些氨基酸的异构化。该异构化似乎涉及效价的某些损失以及化学降解的可能性，并且因此是不希望的。因此，存在消除或减少该异构化的强烈愿望。

如将看到的，本文描述的突变体具有(i)保留的效价，或者(ii)提高的稳定性，或(iii)两者。

发明概述

目前，已经意想不到地发现，帕尼单抗中某些点突变可以减轻帕尼单抗中不希望的异构化和由此导致的降解。例如，帕尼单抗突变体具有从D92至N92变化的轻链氨基酸，并且D92至E92已经表明了相对于帕尼单抗保留的效价和/或提高的稳定性。